水通道蛋白3(AQP3)检测试剂盒说明书

水通道蛋白3(AQP3)检测试剂盒

适用生物 Homo sapiens (Human，人) 
检测范围 0.156-10ng/mL 灵敏度 0.063ng/mL
样本类型 Serum, plasma, tissue homogenates and other biological fluids.
实验时长 4.5h 实验方法 双抗夹心法 
规格 96T

水通道蛋白3(AQP3)检测试剂盒
(酶联免疫吸附试验法)
适用生物：人
使用说明书
仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
[预期应用]
本试剂盒运用双抗体夹心ELISA 法定量测定人血清、血浆、组织匀浆或其它相关生物液体中AQP3 含量。
[试剂盒内容]
试剂名称数量试剂名称数量
96孔板(预包被) 1 96孔板覆膜4
标准品2 标准品稀释液1×20mL
检测溶液A 1×120μL 检测稀释液A 1×12mL
检测溶液B 1×120μL 检测稀释液B 1×12mL
TMB底物1×9mL 终止液1×6mL
浓洗涤液(30×) 1×20mL 使用说明书1
[需自备的设备及试剂]
1、450±10nm 滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2、单道或多道微量加液器及吸头
3、稀释样品的EP 管
4、蒸馏水或去离子水
5、吸水纸
6、盛放洗液的容器
[试剂盒的储存及有效期]
1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶
液A、检测溶液B 以及96 孔板保存于-20oC。
2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于
-20oC，避免潮湿。
注意：
试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1 个月内使用完毕。
产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。
[标本的采集与保存]
1、血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2 小时或4oC 过夜，然后1000×g 离心20 分钟，取上清即
可，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。
2、血浆：用EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30 分钟内于2-8oC 1000×g 离心15 分钟，
取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。
3、组织匀浆：
1） 取适量组织块，于预冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，称重后备用（组织块较大需先剪碎后
再匀浆）；
2） 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃匀浆器，加入5-10mL 预冷PBS 进行充
分研磨，该过程需在冰上进行（有条件实验室可选用机器匀浆）；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融
进一步处理（超声破碎过程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复2 次）。
3） 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟，留取上清即可检测。
4、其它生物标本：请1000×g 离心20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反
复冻融。
注意：
1、以上标本均需密封保存，4oC 保存应小于1 周，-20oC 不应超过1 个月，-80oC 不应超过2 个月。
2、标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
3、标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
[试剂准备]
1、使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC)，试剂不能直接在37oC 溶解。
2、标准品(冻干品)：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10 分钟，同时反复颠倒/搓动以
助溶解，其浓度为20ng/mL(贮液)。先将其稀释为10ng/mL(标准曲线最高浓度)后，再准备7 个稀释标准品
的EP 管，每个EP 管中加入500μL 的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成10ng/mL，5ng/mL，2.5ng/mL，
1.25ng/mL，0.625ng/mL，0.312ng/mL，0.156ng/mL，标准品稀释液(0ng/mL)直接作为空白孔。为保证实验
结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
3、检测溶液A 及检测溶液B：Detection A 及Detection B 在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或
瓶盖的液体沉积到管底。临用前分别以检测稀释液A 或B1:100 稀释(如：10μL 检测溶液A/990μL 检测稀释
液A)，充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μL/孔)，实际配制时应多配制
0.1-0.2mL。
4、浓洗涤液：用580mL 蒸馏水或去离子水将20mL 浓洗涤液稀释至600mL，进行30 倍稀释。
5、底物溶液：请用灭菌的移液器吸头吸取所需体积的TMB 至另一干净容器中使用，容器中剩余的底物应予丢弃，
不要倒回TMB 瓶中。
注意：
1、标准品的稀释不能直接在板中进行。
2、标准品请于临用前15 分钟内配制。该标准品只能使用一次。
3、标准品、检测溶液A 工作液、检测溶液B 工作液请使用相应的稀释液配制，不能混淆。混匀时要轻轻充分混
匀，避免起泡。为保证实验结果的准确请使用微量吸管，并校准微量加液器。请依据所需的量精确配制，尽
量不要微量配制(如吸取检测溶液A 时，一次不要小于10μL)，以避免造成浓度误差。
Tube 1 2 3 4 5 6 7 8 9
ng/mL 20 10 5 2.5 1.25 0.625 0.312 0.156 0
4、请勿重复使用已经稀释过的标准品、检测溶液A 工作液和检测溶液B 工作液。
5、浓洗涤液中如有结晶析出，请先温育至室温，轻轻混匀，至到结晶完全溶解再进行配制。
6、试剂盒中部分试剂为储存液，客户需配置成工作液后使用，在配置过程中如因纯净水质量差或水质污染，以
及实验中所用耗材洁净度差，可能造成实验结果不准确，甚至完全错误，请使用双蒸水。