人单核细胞白血病 THP-1细胞

让ELISA实验不失败的经验

 人单核细胞白血病 THP-1细胞

ELISA检测系统是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在操作过程中总是会出现或大或小的问题，比如说花板、假阳性、全显色、信号值比空白还低等等。下面就由我抛砖引玉地来说一下，做的经验总结：

1、有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，我把方法扼要的列出如下：①亲和素生物素：先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法平均、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。②小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以被其识别， 人单核细胞白血病 THP-1细胞所以保留抗原很重要，我做重组蛋白时，师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。③脂类物质：可将其在有机溶剂（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质天然干固在固相表面。人乙酰胆碱酯酶(AChE)ELISA 试剂盒

2、应留意以下原理：因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附长短特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等 人单核细胞白血病 THP-1细胞的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。包被液的选择，一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时因为试验的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。详细的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下终极可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。　　

3、但终极选用什么，要依据试验详细来实践。常用封锁剂有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明胶；脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使用（5%－10％）；还有一些稀有用到的各种动物血清（主要为了排除相似蛋白干扰）和酪蛋白等等。封锁就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲，从而排斥E 人单核细胞白血病 THP-1细胞LISA试剂盒后的步骤中干扰物质的再吸附。封锁：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。人乙酰胆碱酯酶(AChE)ELISA 试剂盒

4、 在洗板时会有一定误差，人为因素很大（当然有前提的用洗板机除外），洗的不彻底或串了孔，对如斯敏捷的ELISA系统可是不小的影响。由于聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的，清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干扰物质，在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。洗涤板：可以说在ELISA操纵中，洗涤是最主要的枢纽技术。

5、加抗体标本(和二抗)：注意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用pbs稀释，也可用封闭液去稀释。如需加二抗，还要注意二抗的工作浓度，太高浪费，太低则着色浅。

6、显色：显色系统又很多，我们一开始做的时候，要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵，AP结合物可加叠氮钠。

7、每次做尽量要把阴阳空三个对照做好，人乙酰胆碱酯酶(AChE)ELISA 试剂盒如出现问题也好分析。

hz-E10608 人丙型肝炎IgM(HCV-IgM)ELISA试剂盒 Human Hepatitis C virus IgM,HCV-IgM ELISAkit

hz-E10609 人丙型肝炎IgG(HCV-IgG)ELISA试剂盒 Human Hepatitis C virus IgG,HCV-IgG ELISAkit

hz-E10610 人糖蛋白130(gp130)ELISA试剂盒 Human glucoprotein 130,gp130 ELISAkit 

hz-E10611 人促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)ELISA试剂盒 Human corticotropin-releasing factor,CRF 

hz-E10612 人去氨加压素/1-去氨基-8-右旋-精氨酸加压素(dDAVP)ELISA试剂盒 Human Desmopressin/1-desamino-8-D-arginine vasopressin,dDAVP ELISAkit

hz-E10613 人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)ELISA试剂盒 Human muscarinic acetylcholine receptor M3,M-AChR M3 ELISAkit 

hz-E10614 人睾酮受体(TR)ELISA试剂盒 Human Testoterone recepter,TR ELISAkit

hz-E10615 人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)ELISA试剂盒 Human muscarinic acetylcholine receptor,M-AChR ELISAkit

hz-E10616 人糖蛋白49A(Gp49a)ELISA试剂盒 human glycoprotein 49A,Gp49a ELISAkit

hz-E10617 人抑制素β-B(Inhbb)ELISA试剂盒 human inhibin beta-B,Inhbb ELISAkit

hz-E10618 人食欲素受体(OXR)ELISA试剂盒 Human Orexin receptor,OXR ELISAkit

hz-E10619 人生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA试剂盒 Human growth hormone releasing peptide-Ghrelin,GHRP-Ghrelin ELISAkit 

hz-E10620 人钙调素(CAM)ELISA试剂盒 Human calmodulin,CAM ELISAkit

hz-E10621 人真胰岛素(TI)ELISA试剂盒 Human true insulin,TI ELISAkit

hz-E10622 人重酒石酸去甲肾上腺素(NE-B)ELISA试剂盒 Human Noradrenaline Bitartas,NE-B ELISAkit

hz-E10623 人前列环素(PGI)ELISA试剂盒 Human prostacycline,PGI ELISAkit

hz-E10624 人降钙素原(PCT)ELISA试剂盒 Human Procalcitonin,PCT ELISAkit

hz-E10625 人反三碘甲状腺原氨酸(rT3)ELISA试剂盒 Human ReverseTri-iodothyronine,rT3 ELISAkit

hz-E10626 人6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA试剂盒 Human 6-keto-prostaglandin F1a,6-K-PGF1a ELISAkit

hz-E10627 人戊糖素(Pentosidine)ELISA试剂盒 Human Pentosidine ELISAkit

hz-E10628 人变肾上腺素(MN) ELISA试剂盒 Human metanephrine,MN ELISAkit

hz-E10629 人多巴胺D1受体(D1R)ELISA试剂盒 Human Dopamine D1 receptor,D1R ELISAkit

hz-E10630 人肾上腺素能a1A受体(ADRA1A)ELISA试剂盒 Human adrenergic alpha-1A receptor,ADRA1A ELISAkit

hz-E10631 人早老素2(PS-2)ELISA试剂盒 Human Presenilin 2,PS-2 ELISAkit

hz-E10632 人异丙肾上腺素(iso-Hyd)ELISA试剂盒 Human Isoprenaline Hydrochloride,iso-Hyd ELISAkit