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空间记忆的性质

空间记忆的性质空间工作记忆是通过额叶前部脑区域与海马体之间的活动协调来维持的,但一直不清楚这些区域之间的精确解剖联系是什么,也不清楚它们是在什么时间尺度上工作的。在这项研究中,Joshua Gordon及同事确定了额叶前部皮层与海马体之间的一个直接路径,该路径是空间提示信息的正确编码所必需的,但却并不是这些提示信息的维持和提取所需要的。海马体信息在空间工作记忆任务的编码阶段向额叶前部皮层中的神经单元流动,成功的编码需要这两个脑结构之间在网络活动的伽马频带内的同步。这些发现显示了海马体-额叶前部直接输入在空间信息的连续更新中的至关重要性。

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2015.07.01

大鼠 (Rat) 白细胞介素-1β(IL-1β)ELISA 检测试剂盒

大鼠 (Rat) 白细胞介素-1β(IL-1β)ELISA 检测试剂盒本试剂仅供研究使用  标本:血清或血浆 试验原理:IL-1β试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知IL-1β浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-1β和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-1β的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制试剂盒成份(2-8℃保存)   96孔配置   48孔配置   配制   96/48人份酶标板   1块板(96T)   半块板(48T)   即用型   塑料膜板盖   1块   半块   即用型   标准品:240pg/ml   1瓶(0.6ml)   1瓶(0.3ml)   按说明书进行稀稀   空白对照   1瓶(1.0ml)   1瓶(0.5ml)   即用型   标准品稀释缓冲液   1瓶(5ml)   1瓶(2.5ml)   即用型   生物素标记的抗IL-1β抗体   1瓶(6ml)   1瓶(3.0ml)   即用型   亲和链酶素-HRP   1瓶(10ml)   1瓶(5.0ml)   即用型   洗涤缓冲液   1瓶(20ml)   1瓶(10ml)   按说明书进行稀释   底物A   1瓶(6.0ml)   1瓶(3.0ml)   即用型   底物B   1瓶(6.0ml)   1瓶(3.0ml)   即用型   终止液   1瓶(6.0ml)   1瓶(3.0ml)   即用型    自备材料1. 蒸馏水。2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。3. 振荡器及磁力搅拌器等。 安全性1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项1. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。8. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 试剂的准备1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:240 pg/ml   (6号标准品)   原倍浓度不用稀释直接加入50ul。   120 pg/ml   (5号标准品)   100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液   60 pg/ml   (4号标准品)   100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液   30 pg/ml   (3号标准品)   100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液   15 pg/ml   (2号标准品)   100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液   7.5 pg/ml   (1号标准品)   100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液   0 pg/ml   (空白对照)   原始浓度不用稀释直接加入50ul。    2. 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。 操作步骤1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。 建议使用的实验方案标准品浓度(pg/ml)   A   240   240   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   B   120   120   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   C   60   60   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   D   30   30   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   E   15   15   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   F   7.5   7.5   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   G   0   0   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   H   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品   样品     局限6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。 试剂盒性能1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2. 特异性:不与其它细胞因子反应。3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。 结 果 判 断 与 分 析1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值 2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的IL-1β标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的IL-1β含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。 3、检测值范围:0-240pg/ml 4、敏感度: 0.1 pg/ml

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2015.06.29

口腔卫生与心脏健康紧密相关

口腔卫生与心脏健康紧密相关 患有牙周疾病的患者,往往有心血管疾病。牙周疾病是心脏疾病的一个风险因子,就像吸烟和高血压一样。来自阿尔波特大学的研究人员们的最新研究发现,口腔的清洁是如何影响心脏疾病的发病风险的。此项研究结果于近日发表在PLOS ONE杂志上。许多人们没有意识到口腔健康可以影响到全身的器官。此项研究结果表明,患有牙周疾病的患者,有较高的风险发生心血管疾病。研究人员利用临床前小鼠模型,发现了一种新的细胞受体,CD36/SR-B2,这种受体可以与口腔中的细菌相互作用,从而引起牙周疾病。CD36/SR-B2可以与Toll样受体相互作用(Toll样受体是免疫系统早期的警戒防线),并产生出一种名为IL-1 beta的蛋白。这种蛋白可以引起炎症,最终导致牙周疾病和动脉粥样硬化。这项发现提供了牙周疾病与心血管疾病相互联系的理论基础。之前的研究已经证明,Toll样受体是涉及到牙周疾病及心血管疾病的相互关系中的。此项研究发现了CD36/SR-B2是一个新的,共同作用的受体,从而促进了炎症及疾病发生。下一步,研究人员们将开展研究,如何靶向这两种受体,从而阻止心脏疾病的发生。因此,早期诊断和治疗牙周疾病,对于降低和预防炎症和心脏病风险,至关重要。然而,人们常常在牙周病的早期,由于没有影响到日常生活,所以并不重视,直到牙齿出现松动或是异常才去看牙科医生。事实上,常规的牙齿检查及转业的牙齿清洁,对保持口腔卫生及身体健康,都十分关键。因为许多疾病,早期的诊断和治疗比晚期的治疗简单而且便宜得多。

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2015.06.29

大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 96T0.1ng/ml - 5ng/ml使用目的:本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中血小板因子4(PF-4/CXCL4)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)水平。用纯化的大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入血小板因子4(PF-4/CXCL4),再与HRP 标记的血小板因子4(PF-4/CXCL4)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血小板因子4(PF-4/CXCL4)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品(8ng/ml) 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。4ng/ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液2ng/ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液1ng/ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液0.5ng/ml 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液0.25ng/ml 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 个月

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2015.06.25

流式检测细胞样品的制备

流式检测细胞样品的制备方案A:组织培养细胞的制备。方案B:淋巴组织细胞制备。方案C:非淋巴组织细胞制备。方案D:全血PBMC的分离。小贴士1、流式细胞仪检测需要将细胞制备成单细胞悬液。2、避免细胞成团,以免堵塞流式细胞仪。3、实体组织制备单细胞悬液需要物理方法分离或酶消化法进行,具体组织的方法,依照经验来进行。方案A: 组织培养细胞的制备实验材料:Accutase? 酶细胞分离培养基 (eBioscience Cat. No. 00-4555)eBioscience? 流式染色缓冲液 (eBioscience Cat. No. 00-4222)15ml或50ml的离心管。实验流程:1、如果是悬浮细胞,则小心将细胞移入离心管中,进行计数和活力分析。进行步骤3.2、如果是贴壁细胞,建议使用Accutase? 酶细胞分离培养基 (eBioscience Cat. No. 00-4555)是细胞团块分离,制备成单细胞悬液后置于离心管中计数和活力分析。(注意:accutase 可能会改变某些细胞表位,应该预实验观察避免其干扰检测)3、300g 离心5min。弃去上清,应用适量的流式染色缓冲液重悬细胞,调整细胞浓度为2×107/ml。方案B:淋巴组织细胞制备。实验材料:60×15mm 的组织培养皿5ml 注射器细胞过滤器(尼龙网过滤)eBioscience? 流式染色缓冲液 (eBioscience Cat. No. 00-4222) 15ml或50ml的离心管。实验方案:1、获取组织(脾脏,淋巴结或胸腺)加入5~10ml eBioscience? 流式染色缓冲液 (eBioscience Cat. No. 00-4222),使用5ml注射器注射心研磨组织(或采用两片载玻片研磨亦可)。 2、收集磨碎的细胞悬液,过滤至离心管中计数和活力分析。 3、300g 离心5min。弃去上清,应用适量的流式染色缓冲液重悬细胞,调整细胞浓度为2×107/ml。方案C:非淋巴组织细胞制备。剪刀和手术刀片剪刀和手术刀片 PBS 60×15mm 的组织培养皿 5ml 注射器 细胞过滤器(尼龙网过滤) eBioscience? 流式染色缓冲液 (eBioscience Cat. No. 00-4222) 15ml或50ml的离心管。实验流程:1、获取组织剪碎或切碎组织为2~4mm碎块,用PBS稀释适量的酶进行消化(温度,方法依照酶的说明书)。 2、小心分离细胞团块,过滤除去死细胞和碎片。 3、300g 离心5min,弃去上清。加PBS 5ml 300g 离心5min,弃去上清,重复一次。计数和活力分析。 4、300g 离心5min,弃去上清,应用适量的流式染色缓冲液重悬细胞,调整细胞浓度为2×107/ml。方案D:全血PBMC的分离。实验材料: PBS Ficoll? 淋巴细胞分离液 eBioscience? 流式染色缓冲液 (eBioscience Cat. No. 00-4222) 15ml或50ml的离心管。实验流程: 1、以PBS 1:1稀释血样。将血样轻轻加到2ml Ficoll? 淋巴细胞分离液或其他品牌亦可。 2、1000g离心20min,小心吸取分离液和PBS之间的雾状细胞,即为PBMC。至新的离心管中。 3、4度,300g 离心5min,弃上清。应用适量的流式染色缓冲液重悬细胞,计数和细胞活力,调整细胞浓度为2×107/ml。

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2015.06.25

新节食方法既可减肥又可延缓衰老

新节食方法既可减肥又可延缓衰老近日,来自美国南加州大学的研究人员在国际学术期刊cell metabolism在线发表了一项最新研究进展,他们发现周期性摄入能够模拟饥饿效应的低卡路里饮食(FMD)可能对健康大有益处。 在这项新研究中,研究人员发现周期性摄入低卡路里饮食能够减少内脏脂肪,并能够增加老年小鼠一些重要器官中始祖细胞和干细胞的数目,其中包括大脑,研究人员发现这种饮食方法能够促进神经元再生并可以提高学习和记忆能力。 除小鼠之外,研究人员还利用了酵母和人群进行相关研究。小鼠的寿命相对较短,能够为低卡路里饮食对寿命的影响提供一些细节信息;酵母是一种相对简单的真核生物,但却是在细胞水平上揭示低卡路里饮食触发的生物学机制的理想模型;而利用人群进行先导性研究能够为基于小鼠和酵母进行的研究提供有力支持。 在该研究中,研究人员以4天为一个低卡路里饮食期限,每两个月进行一次FMD饮食,对中等年龄的小鼠进行了研究,结果表明这种饮食方法可以延长寿命,降低癌症的发生,促进免疫系统功能,降低炎症疾病发生,延缓骨矿物质密度损失并能增强老年小鼠的认知学习能力。但这种FMD饮食小组和对照饮食小组的月总卡路里摄取是相同的,这表明这种健康获益并不是靠完全控制饮食实现的。 而在先导性人群研究中,研究人员选取了19名参与者,给予类似的低卡路里饮食,每个月进行一次,一次持续5天,结果发现与衰老,糖尿病,心血管疾病和癌症有关的生物标记物和风险因子都出现下降,同时没有发现任何有害副作用。 研究人员最后指出,严格的饥饿状态对于人们来说很难保持,同时也是非常具有危险性的,而这种周期性低卡路里饮食策略能够在体内触发相同的健康效应,同时这种方法也更加容易更加安全。 总得来说,这项研究表明低卡路里饮食对健康有很大益处,同时还证明摄入模拟饥饿效应的低卡路里饮食对于减肥、抗衰老、抗糖尿病、抗癌都非常有好处,是一种更加简单更加安全的好方法。

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2015.06.23

大鼠总抗氧化力(TAOC)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

大鼠总抗氧化力(TAOC)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围:                                                          96T0.3U/ml - 9U/ml 使用目的:本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中总抗氧化力(TAOC)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠总抗氧化力(TAOC)水平。用纯化的大鼠总抗氧化力(TAOC)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入总抗氧化力(TAOC),再与HRP标记的总抗氧化力(TAOC)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的总抗氧化力(TAOC)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠总抗氧化力(TAOC)浓度。 试剂盒组成 1   30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶   7   终止液   6ml×1瓶   2   酶标试剂   6ml×1瓶   8   标准品(16U/ml)   0.5ml×1瓶   3   酶标包被板   12孔×8条   9   标准品稀释液   1.5ml×1瓶   4   样品稀释液   6ml×1瓶   10   说明书   1份   5   显色剂A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2张     6   显色剂B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1个   标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。8U/ml   5号标准品   150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液   4U/ml   4号标准品   150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液   2U/ml   3号标准品   150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液   1U/ml   2号标准品   150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液   0.5U/ml   1号标准品   150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液     2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:  计算  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月 

标准

2015.06.23

大鼠组胺(HIS)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

大鼠组胺(HIS)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围:                                                          96T1.5μg/L -40μg/L 使用目的:本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中组胺(HIS)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠组胺(HIS)水平。用纯化的大鼠组胺(HIS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入组胺(HIS),再与HRP标记的组胺(HIS)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的组胺(HIS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠组胺(HIS)浓度。 试剂盒组成 1   30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶   7   终止液   6ml×1瓶   2   酶标试剂   6ml×1瓶   8   标准品(80μg/L)   0.5ml×1瓶   3   酶标包被板   12孔×8条   9   标准品稀释液   1.5ml×1瓶   4   样品稀释液   6ml×1瓶   10   说明书   1份   5   显色剂A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2张     6   显色剂B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1个   标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。40μg/L   5号标准品   150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液   20μg/L   4号标准品   150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液   10μg/L   3号标准品   150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液   5μg/L   2号标准品   150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液   2.5μg/L   1号标准品   150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液     2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:  计算  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月 

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2015.06.23

那些被吃进去的益生菌

那些被吃进去的益生菌肠道微生物群是存在人体肠道的微生物群体的总称,其中包括了细菌、真菌、古菌以及原生物动植物(甚至病毒)等种类众多的微生物。由于测序技术的提高,近二十年来,科学界越来越关注肠道微生物菌群。也有很多的证据表明,肠道微生物菌群对于人体的健康有着很大影响。这种影响不仅局限于肠道,还可能对大脑、肝脏这样的器官产生影响,相反的,人体对肠道微生物也有影响。因此,未来我们或许可以通过调节肠道微生物菌群,对我们来管理我们的身体状态。近期发表在《Trends in Microbiology》的综述文章,具体讨论了从食物来源进入肠道的益生菌群体(主要是双歧杆菌、乳酸菌和丙酸杆菌)是如何影响肠道原有的微生物群体的。从食物中进入人体的这三种微生物类群是常用在食品发酵工业中的微生物,从数量上来说,在肠道中占据着很大比例。作者们分析了很多的临床数据,综述了一些研究文章,他们认为这些来自食物的菌群确实影响着肠道微生物群和宿主健康。从食物进入肠道的很多益生菌确实能够进入小肠,而且躲过了胃里的强酸环境而仍然顽强的或者,并还有生理活性,可以完成一些分子的合成代谢。这些微生物占据着正常肠道微生物群体的一部分,并且很多次在肠道微生物群的分析中被检测出来。实际上,很多研究都表明,通过食物进入人体的这些益生菌,对原有的微生物菌群的组成并没有太大的影响,但是对某些特定的微生物群体会产生影响。例如,会导致产短链脂肪酸菌群增加,从而使得产蛋白菌群数量减少,这是这些微生物导致碳水化合物代谢变化的一个例子。此外,这些来自食物的微生物也会影响着婴儿肠道微生物菌群的形成。作者们认为,来自食物的益生菌能够影响碳水化合物代谢的研究是很激动人心的。例如,这些细菌可以促进短链脂肪酸和丁酸盐的合成增加,而减少蛋白质的合成量。已有的证据表明,蛋白合成量大和丁酸盐合成量减少是对人体健康不利的。比如会造成肠道系统紊乱和导致二型糖尿病发病率的增加。这就为这些益生菌为啥会是“益生菌”提供了证据。其他类型的益生菌代谢物,例如三甲胺,也被认为与心血管疾病已经氨基酸代谢密切关联。合理地选择研究的微生物类型,并通过临床研究来确认他们的功能,这或许能够让我们研发新一代的可食用益生菌,帮助我们解决身体困扰。

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2015.06.19

上海沪震2015端午节放假通知

上海沪震2015端午节放假通知 尊敬的客户,公司各职员:        您们好!感谢大家长期关注上海沪震生物动态,根据国家法定假期的规定,并结合公司实际情况,现对端午节放假做如下安排:一、放假时间6月20日至22日(星期六至星期一)放假,共3天。其中,6月20日(星期六)为端午节假期,6月21日(星期日),6月22日(星期一)为法定节假日照常补休。二、请公司各职员做好自己的节前工作安排。三、放假期间本公司不安排人员值班,如有订购产品请发送留言至我司网站平台,我们会在节后上班第一时间及时为您办理订货发货。各网站均有在线留言咨询栏。对此给您带来的不便我们深感抱歉。感谢你的支持与理解。                                                              上海沪震 特此通知! 

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2015.06.19

人内皮素(ET)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

人内皮素(ET)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 96T10pg/ml-480pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中内皮素(ET)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人内皮素(ET)水平。用纯化的人内皮素(ET)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入内皮素(ET),再与HRP标记的内皮素(ET)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的内皮素(ET)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人内皮素(ET)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品(960pg/ml) 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1. 血清:室温血液自然凝固10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液:用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。5.培养细胞:检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。6.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融8.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。480pg/ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液240pg/ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液120pg/ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液60pg/ml 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液30pg/ml 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 个月

标准

2015.06.17

人内脂素/内脏脂肪素(visfatin)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

人内脂素/内脏脂肪素(visfatin)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 48T15pg/ml-400pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本内脂素/内脏脂肪素(visfatin)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人内脂素/内脏脂肪素(visfatin)水平。用纯化的人内脂素/内脏脂肪素(visfatin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入内脂素/内脏脂肪素(visfatin),再与HRP 标记的内脂素/内脏脂肪素(visfatin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的内脂素/内脏脂肪素(visfatin)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人内脂素/内脏脂肪素(visfatin)浓度。试剂盒组成1 20 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液3ml×1 瓶2 酶标试剂3ml×1 瓶8 标准品(800pg/ml) 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×4 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液3ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液3ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液3ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。400pg/ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液200pg/ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液100pg/ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液50pg/ml 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液25pg/ml 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液:将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 个月

标准

2015.06.17

地球所有DNA分子加起来有多大?装满十亿个集装箱!

地球所有DNA分子加起来有多大?装满十亿个集装箱!科学家还认为,存储在所有现在动植物DNA分子中的基因信息足以达到一百万兆台超级计算机的处理能力上限。图为上海超级计算机中心的曙光5000A超级计算机(Dawning 5000A)爱丁堡大学的专家们通过计算得出,机器要想达到DNA在细胞蛋白质内解码的速度,必须达到每秒10的24次方次的运算速度。该研究的主要作者,汉娜·拉登马克(Hanna Ladenmark)表示,通过将生命分解为无数个储存着基因编码的分子,科学家能够对地球生物圈的功能有进一步的了解。而反过来,通过加深这种理解,生物圈也能得到更好的保护。例如,这种方法可以用来量化因栖息地减少导致的物种数量变化。专家认为,植物的总DNA数量比其它物种都要多,而如细菌之类的单细胞生物则紧随其后。有趣的是,据科学家估算,动物和病毒的总DNA数量十分相近。尽管线粒体在所有生命体中都存在,能够简化研究者复杂的计算过程,但研究者们并没有将线粒体等细胞器中的DNA计算在内。他们表示:“我们采用的方法也许能帮助我们更好地理解生物圈变化的复杂性,并用新的方式对未来生物圈的变化做出预测,既包括人为的变化,也包括自然的变化。”领导这次研究的查尔斯·柯克(Charles Cockell)教授补充道:“这为我们提供了一种看待生物圈总体信息的方式,以及看待其变化的方式,而不是仅仅从数量和种类上关注生物的多样性。

百态

2015.06.17

人水通道蛋白1(AQP1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

人水通道蛋白1(AQP1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 96T0.3μg/L -8μg/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清样本中水通道蛋白1(AQP1)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人水通道蛋白1(AQP1)水平。用纯化的人水通道蛋白1(AQP1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入水通道蛋白1(AQP1),再与HRP 标记的水通道蛋白1(AQP1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的水通道蛋白1(AQP1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人水通道蛋白1(AQP1)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品(16μg/L) 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1. 血清:室温血液自然凝固10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液:用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。5.培养细胞:检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。6.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融8.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。8μg/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液4μg/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液2μg/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液1μg/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液0.5μg/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 个月

标准

2015.06.15

人髓鞘碱性蛋白(MBP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

人髓鞘碱性蛋白(MBP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 96T100pg/ml-4000pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆、脑脊液及相关液体样本中髓鞘碱性蛋白(MBP)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人髓鞘碱性蛋白抗体(MBP)水平。用纯化的人髓鞘碱性蛋白 (MBP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入髓鞘碱性蛋白(MBP),再与HRP 标记的髓鞘碱性蛋白 (MBP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的髓鞘碱性蛋白(MBP)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人髓鞘碱性蛋白 (MBP)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(8000pg/ml) 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。4000pg/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液2000pg/ml 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液1000pg/ml 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液500pg/ml 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液250pg/ml 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 个月

标准

2015.06.15

要想记忆好 睡眠不可少

要想记忆好 睡眠不可少近日,来自佛罗里达的Scripps研究所(TSRI)的研究人员们发现,睡眠可以抑制一些促进遗忘的神经细胞的活性,从而确保记忆得以保存。此项研究在线发表于Cell杂志上。早前的研究认为,睡眠促进了记忆的保留,这个过程是通过阻止了一些来源于心理和行为活动的干扰。也就是说,睡眠可以将大脑与所有可以干扰记忆储存的刺激隔离开来。而此项最新的研究证明,睡眠促进记忆力保留是通过提高巩固记忆的能力。研究人员们利用果蝇作为动物实验模型,他们发现了早前研究的生物学基础,即神经递质多巴胺的活性。多巴胺的活性可以调节多种"可塑性",例如,大脑学习和记忆的能力,及遗忘的能力。研究发现,用促进睡眠的药物Gaboxadol,或者是利用遗传方式刺激睡眠的神经回路,来增加睡眠,均可以降低多巴胺的信号活性,同时可以提高记忆力。反过来,如果增加清醒状态,刺激多巴胺的信号,则可以加速遗忘过程。这种信号活性不是一成不变的,而是与动物的清醒状态紧密相关。研究人员们表示,睡眠对记忆保留及遗忘的能力,可能是同时进行的,而且是互不干扰的;也有可能更为复杂,有一系列的先后顺序,例如,先有遗忘能力的下降,接着是记忆能力的提高。通过此项研究,科学家们发现了睡眠可以保护记忆的一种方式,即通过抑制可引起遗忘的多巴胺的神经活性。由于动物和人类均需要睡眠,且均有许多学习和记忆的基因和神经回路机制,所以,在果蝇动物模型上的发现,可以为研究人类睡眠与记忆的关系,提供有用的理论基础。

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2015.06.15

人血栓烷素B2(TXB2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

人血栓烷素B2(TXB2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 96T3 ng/L -120 ng/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中血栓烷素B2(TXB2)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血栓烷素B2(TXB2)水平。用纯化的人血栓烷素B2(TXB2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入血栓烷素B2(TXB2),再与HRP 标记的血栓烷素B2(TXB2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血栓烷素B2(TXB2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人血栓烷素B2(TXB2)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品(240 ng/L) 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1. 血清:室温血液自然凝固10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液:用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。5.培养细胞:检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。6.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融8.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。120 ng/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液60 ng/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液30 ng/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液15 ng/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液7.5 ng/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 个月

标准

2015.06.10

降胆固醇药与记忆损伤有什么联系

降胆固醇药与记忆损伤有什么联系近日,来自美国罗格斯大学的研究者在JAMA Internal Medicine刊登了他们的一项研究成果,当病人服用他汀类药物和非他汀类降胆固醇药物后30天,相比不服用药物的患者而言,服药患者的记忆发生了缺失,这就表明,他汀类药物和非他汀类降胆固醇药物的服用或和个体记忆缺失直接相关。但研究者表示,之所以会出现这样的关联性关系是因为服药病人通常会经常同医生交流病情及服药效果等,这就便于医生们发现他们记忆缺失的症状;研究者们通常会在很多案例研究中描述服用他汀类药物和急性记忆缺失直接相关,但本文研究却表明长期服用他汀类药物要么改善个体的记忆要么对个体记忆无影响。Brian L. Strom博士说道,本文中我们将482543名他汀类使用患者和另外两个对照组:482543任何降脂药物(LLDs)都不服用的个体和26484名服用非他汀类的降脂药物,比如考来烯胺、盐酸考来替泊、氯贝丁酯等;同时研究者还进行了二次病例交叉研究,利用诊断标准来收集个体记忆缺失的相关数据。研究者对比他汀类药物使用者和任何降脂药物都不服用的个体后发现,在疗法开始时的30天里他汀类药物使用者的记忆缺失风险会增加,而对比服用非他汀类的降脂药物的个体和任何降脂药物都不服用的个体,研究者发现在服药30天里个体的记忆缺失风险也会增加;而将他汀类药物使用者同非他汀类降脂药物的使用者进行对比后却没有发现记忆缺失和药物服用之间的关联性。最后研究者表示,我们发现要么所有的降脂药物都会引发个体急性的记忆缺失,要么是非常有可能引发记忆缺失,而这种关联性或许是检测偏差的结果,而检测偏差或许具有较高的可能性,当然研究者后期还将对接受预防性疗法的病人进行检测确定,比如服用降胆固醇药物的患者。

标准

2015.06.10

风湿性关节炎新型治疗方法

风湿性关节炎新型治疗方法一项新的研究发现一类新的治疗风湿性关节炎的潜在治疗靶点,该靶点能够显著提高风湿性关节炎的治疗效果,同时不会引起免疫反应。这项研究是由美国加利福尼亚州La Jolla过敏与免疫研究所,细胞生物学分所的Karen M. Doody博士领导完成的,该研究发表在今年5月20号的《science Translational Medcine》杂志上。 "目前这方面的治疗方法通常是通过破坏免疫系统达到治疗的目的,然而,大约40%的风湿性关节炎患者并不能达到明显的治疗效果,如果进一步的抑制免疫反应,则会引发感染"。来自美国UCSD医学院的副教授Bottini博士说到。 "因此,我们希望能够准确地针对关节部位引起软骨与骨骼损坏,以及炎症反应的细胞类型,然后开发出一些疗法,结合目前的治疗方法提高疾病的控制效率。" 目前对于成纤维滑膜细胞(引发风湿性关节炎的关键因子)的靶向治疗还没有适合的方法。Bottini认为成纤维滑膜细胞能够释放蛋白酶消化软骨组织,同时它们能够促进成骨细胞的分化,从而攻击骨骼并产生侵蚀效果。"通过阻断成纤维滑膜细胞,就能够直接起到保护关节免受损害的效果"。 在一系列实验中,Bottini博士等人鉴定出一类叫做RPTP的蛋白酶,这一类酶大量表达于成纤维滑膜细胞表面,并调节了疾病发生中的生理过程。之后,他们开发出一类控制RPTP磷酸酶活性的药物干预手段,结果显示,通过一类蛋白多糖与RPTP胞外的结构域相结合能够显著降低小鼠的风湿性关节炎疾病严重程度。 "风湿性关节炎是一类自身免疫性疾病,因此人们往往想通过调节免疫系统的活性起到缓解疾病的目的。然而,如果能够同时控制关节部位的靶向细胞,那么对于免疫系统的控制则不用太过激了。"

标准

2015.06.10

人早期分泌抗原靶6(ESAT-6)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

人早期分泌抗原靶6(ESAT-6)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围:                                                          96T2pg/ml-48pg/ml 使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中早期分泌抗原靶6(ESAT-6)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人早期分泌抗原靶6(ESAT-6)水平。用纯化的人早期分泌抗原靶6(ESAT-6)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入早期分泌抗原靶6(ESAT-6),再与HRP标记的早期分泌抗原靶6(ESAT-6)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的早期分泌抗原靶6(ESAT-6)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人早期分泌抗原靶6(ESAT-6)浓度。 试剂盒组成 1   30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶   7   终止液   6ml×1瓶   2   酶标试剂   6ml×1瓶   8   标准品(96pg/ml)   0.5ml×1瓶   3   酶标包被板   12孔×8条   9   标准品稀释液   1.5ml×1瓶   4   样品稀释液   6ml×1瓶   10   说明书   1份   5   显色剂A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2张     6   显色剂B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1个   标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。48pg/ml   5号标准品   150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液   24pg/ml   4号标准品   150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液   12pg/ml   3号标准品   150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液   6pg/ml   2号标准品   150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液   3pg/ml   1号标准品   150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液     2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:  计算  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月 

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2015.06.08

基因改造的超级运动员已经离我们不远了

基因改造的超级运动员已经离我们不远了在婴儿出生之前就把他们设计为未来的运动员?我们离这一步还有多远?就在上个月,一个来自中国的团队宣称他们可以改造人类胚胎细胞核的DNA,登上了新闻头条。暂不论这种研究是否有违伦理,这项突破让人们不禁疑问,我们距离改造自己的基因还有多远?这个中国团队的工作是用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)技术实现的,结果并不理想——接受注射的86个卵细胞中只有4个的基因被成功修饰。尽管如此,哈佛大学George Church教授相信,在5~7年内,通过剪切并替换DNA链来从基因角度改造婴儿将成为可能。但是这种研究真的应该进行吗?考虑到父母都期盼能给他们的孩子一个更好的未来,哪些基因改造是我们可以接受的呢?设计婴儿1988年,伦敦哈姆斯密医院的医生首创了一项叫做植入前遗传学诊断(pre-implantation genetic diagnosis,PGD)技术。利用这种诊断技术,医生可以“设计”一个不带遗传性疾病基因的婴儿。PGD的第一步是进行试管受精(in-vitro fertilisation,IVF),然后父母可以测试他们的胚胎,以保证其在植入母体之前不会携带有缺陷的基因。自1988年第一例PGD婴儿诞生以来,已经有超过12 000个婴儿通过这项技术出生。在可见的将来,预期PGD的使用频率将会提高。可以预见,PGD有一天将会像羊膜穿刺术一样普遍,成为另一项检测胎儿畸形的常规孕前检查。曾经无数伴侣花费数月甚至数年,试图受孕,继而又历经数月期盼宝宝一切安好,这在将来的某一天看起来会很奇怪、落后,几乎像是原始人类的行为。设计运动员挑选具有特定基因的胚胎使得父母对于其子女基因组成拥有了前所未有的强大决定权。不久,除了用来避免让子女继承不好的基因,父母是否会使用这一技术,使得孩子拥有某些特定的性状——例如运动能力?这并非天方夜谭。父母们已经在使用PGD来决定未出生孩子的性别。2009年,一个美国诊所更进一步,宣布可以为伴侣提供一项新的服务,让他们可以让婴儿具有某些身体特长(这项提议随后被撤回)。已经推出了“家族特征遗传计算器”服务的个人基因组和生物技术公司“23andMe”也已经准备好为设计婴儿出力了。2013年9月,这个公司获批了一个产品专利,允许准父母们:“……选择捐精者,来观察其与受捐者结合得到的配子发育成的孩子可能出现的表现型,如饮酒脸红,乳糖不耐症肌肉表现以及其他适当的表现型。按照这个趋势,这种服务以后完全有可能满足这种要求:“……这个数据库中哪位捐精者的基因和我的基因一起,最可能生出一个比父母高,跑得比父母快的小孩?这个公司很快便否认,表示不会真的提供捐精者配子筛选服务,以平息批评,他们的计算只提供:“……一种参与其中的方式……来观察你的孩子有哪种特长可能是遗传自你。因此,目前这个阶段,父母还不能面对一个目录,列出他们想要的选项,来设计自己的孩子。但是显而易见,这在不远的将来会成为现实。智力和健康选项会在首页,美貌排在第三页,运动能力排在后面一点。这些技术的一个根本劣势:我们只能挑选捐赠精子和卵子中存在的基因。目前单次IVF-PGD中能够产生和检测的胚胎数也限制了父母在一个胚胎中能挑选的婴儿特征数量。这些限制可能会催生基因治疗的需求。如果基因治疗真能不负众望,父母将不用选择具有运动特长基因的胚胎,而是能够把他们想要的任何数目的基因插入胚胎或者配子(卵子和精子)中。再说一次,这不是天方夜谭。如上所述,这种技术的蓝图已经就绪。但将这一研究提升一个层次还存在争议性。研究的局限回到3月,一些世界顶尖的基因科学家在《自然》上发表了一篇评论,呼吁暂停对可以产生人类胚胎的细胞进行基因改造研究。但不是每一个人都反对改造人类基因组的想法。美国生物学家James Watson和英国生物学家Francis Crick于1953年一起发现了DNA结构,震惊全球。他力挺基因改造,以给人们带来美貌和智慧。纽约大学医学院2009年的一项研究显示,受访父母中有10%支持基因测试,以确保他们的孩子体质健壮。五年后,一项针对1001个美国人的调查显示,有26%的受访者认为, “准父母可以改变他们孩子的DNA,以得到更聪明,健康,甚至健美的后代”是一件很好的事。当然,在幻想中的运动员婴儿变成现实之前,还有很多困难需要克服。尽管经过30年的研究,基因对运动表现的贡献有多少(虽然科学家,包括维多利亚大学的研究人员,正在研究这个问题),我们对此知之甚少。

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2015.06.08

你的Y染色体丢基因了吗?

你的Y染色体丢基因了吗?研究发现人和哺乳动物的Y染色体出现多个基因丢失的现象,而关键的Y基因会通过迁到其他染色体上被“救”回来,这可能是识别男性潜在的不育的重要遗传因素。这项研究近期发表在Genome Biology杂志上。在日本土生土长的Ryukyu刺鼠是一个Y染色体上的基因消失的极端例子。Ryukyu刺鼠的Y染色体完全消失,许多本来在Y染色体上的基因移至X染色体或常染色体上。原本以为这个例子是被隔绝物种中的特例。但最近结果表明基因从性染色体移动到常染色体上的现象在哺乳动物中非常常见,包括人类在内。来自美国怀特黑德研究所、本文第一作者Jennifer Hughes说,“在Y染色体上存活下来的基因寿命相当之长,可能起到重要的生物学功能。但是一些哺乳动物中的确存在许多Y染色体上的关键基因丢失的例外。很多情况下,这些基因并不是完全被丢掉,而是在基因组中找到‘新住处’。”“我们揭秘了在Y染色体上丢失的4个基因通过移到其他染色体上存活下来,它们在蛋白质合成和降解起到重要作用。这是第一次在人类和其他不同种哺乳动物中证明这一现象的发生。这些重新定居的基因终归需要存在于基因组中,毕竟他们对正常的个体发育必不可少。研究小组对人类、猿类、啮齿类动物、牛和有袋类,寻找基因从性染色体重组到常染色体的证据。利用物种分支的进化记录,科学家们构建了特定基因随时间迁移的系谱图。EIF2S3基因拷贝在啮齿类动物X和Y染色体上均被发现,而在Y染色体上的拷贝对精子早期形成起到至关重要的作用。而在人类基因组中,这个基因在Y染色体上丢失了,但是整个基因组中还是两个拷贝—一个在X染色体上,另一个在常染色体上。这就说明,这个基因在Y染色体上的拷贝丢失后,X染色体在常染色体上备份了一个EIF2S3基因,同时说明了基因的重要性。人睾丸组织中EIF2S3基因的常染色体拷贝比其他组织显示有更高的活跃度,说明EIF2S3基因在精子产生过程中发挥的重要作用,可能是男性不育症有关的遗传因素。Hughes补充说:“这项研究加深了我们对性染色体,基因和性别特征的作用的了解,进一步的研究仍要继续进行。”

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2015.06.08

人半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

人半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 96T50μg/L -1800μg/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)水平。用纯化的人半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB),再与HRP 标记的半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(3200μg/L) 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。1600μg/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液800μg/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液400μg/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液200μg/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液100μg/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 个月

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2015.06.05

孕妇肥胖或增加自身及婴儿的健康风险

孕妇肥胖或增加自身及婴儿的健康风险近日,来自哥德堡大学等处的研究人员通过研究指出,肥胖女性或在怀孕期间会增加一系列健康风险,不光是对自己而且还会对婴儿产生影响,相关研究刊登于国际杂志Obesity Reviews上。研究者表示,肥胖女性应当在其怀孕前减肥,同时研究者也呼吁需要对这一类个体进行支持帮助。据研究者介绍,全球的孕妇肥胖率已经达到了流行病学的程度,20—39岁的孕妇肥胖流行率在美国为31.9%,在欧洲为30%至37%;孕妇肥胖被定义当女性个体怀孕时其BMI指数大于等于30kg/m2,而健康的怀孕BMI为18.5至24.9 kg/m2;孕妇肥胖往往会引发一系列的风险问题,比如早产、胎儿缺陷、先天异常等疾病,而且相比健康体重的孕妇而言,在肥胖孕妇中母乳喂养率也较低,而且早期母乳喂养停止的风险也较高。研究者Cecily Begley教授说道,在爱尔兰,5个孕妇中就有1人会遭受肥胖,这并不应该责难孕妇,而是因为体重的问题,因此我们需要对女性个体进行孕前教育,以及通过一系列的程序来帮助其减肥,从而降低疾病风险。为了对怀孕女性和肥胖相关的所有风险进行深入的分析,研究者对22篇系统性综述文章进行了系统性地回顾分析,共对573项研究进行了分析,对比了肥胖孕妇和健康体重孕妇的相关研究数据。女性个体怀孕期间肥胖的潜在并发症会引发一系列的问题,包括住院时间较长、花费较大等问题,而减肥对于肥胖孕妇有效降低自身及婴儿的患病风险非常关键,也非常必要。后期研究中研究者还将进行大量的分析研究来阐明肥胖对孕妇及婴儿的健康危害,为后期开发相应的干预措施来预防相关疾病的发生提供一定的帮助和思路

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2015.06.05

新型类风湿性关节炎疗法早期临床试验成功

一篇刊登在国际杂志Science Translational Medicine上的研究论文中,来自昆士兰大学的研究人员通过研究开发了世界上首个疫苗类型的治疗类风湿性关节炎方法。目前这种疗法可以安全且有效地抑制机体免疫反应;类风湿性关节炎这种疾病在澳大利亚影响着超过45万人的健康,其主要特点为免疫系统攻击机体健康组织,尤其是关节,会引发炎症、疼痛及畸形等症状。研究者Thomas说道,当前的疗法仅能够有效缓解患者的症状,并且减缓疾病的进展,而我们设计出的这种疫苗类型的疗法或免疫疗法可以特异性地对携带类风湿性关节炎风险基因或特异性抗体的个体进行作用,这一类类风湿性关节炎名为CCP-阳性类风湿性关节炎,其占据了大多数的患病病例。目前这种疗法可以帮助机体免疫系统忽略机体自然产生的肽类,而这种肽类被机体免疫系统误认为是外源性的肽类,从而就会引发CCP抗体及炎症的产生;而个体化的免疫疗法往往通过获取患者血样及提取树突细胞来进行开发,患者的树突细胞随后就会攻击“外源性”的肽类。研究者表示,单一注射病人自身的将免疫修饰的树突细胞可以非常安全,且有效帮助抑制患者机体的免疫反应,这反过来又会减少机体炎症。在这一阶段,这一技术对于抑制类风湿性关节炎患者并不是最理想的,因为其非常昂贵,而且耗时;然而当前的研究却为开发一种有效的疫苗提供了一定的帮助,而研究者目前也正在着力开发新型的运输技术,如果其可以有效治疗类风湿性关节炎患者,那么其或许也可以用于治疗其它的自身免疫疾病,比如1型糖尿病等

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2015.06.05

人CD8分子(CD8)酶联免疫分析试剂盒

人CD8分子(CD8)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 96T2 IU /ml -80 IU /ml使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中CD8 分子(CD8)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人CD8 分子(CD8)水平。用纯化的人CD8 分子(CD8)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入CD8 分子(CD8),再与HRP 标记的CD8 分子(CD8)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CD8 分子(CD8)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人CD8 分子(CD8)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品(160IU /ml) 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1. 血清:室温血液自然凝固10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液:用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。5.培养细胞:检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。6.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融8.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。80 IU /ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液40 IU /ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液20 IU /ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液10 IU /ml 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液5 IU /ml 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 个月

标准

2015.06.03

ELISA技术测定单克隆抗体效价方法

ELISA技术测定单克隆抗体效价方法ELISA 是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原分子上,形成酶标抗体/酶标抗原,称为酶结合物。该酶结合物的酶在免疫反应后,作用于底物使之呈色,根据颜色的有无和深浅,定位或定量抗原/抗体。ELISA 法是免疫酶技术的一种,其特点是利用聚苯乙烯微量反应板(或球)吸附抗原/抗体,使之固相化,免疫反应和酶促反应都在其中进行。在每次反应后都要反复洗涤,这既保证了反应的定量关系,也避免了末反应的游离抗体/抗原的分离步骤。在ELISA 法中.酶促反应只进行一次,而抗原、抗体的免疫反应可进行一次或数次,即可用二抗(抗抗体)、三抗再次进行免疫反应。目前常用的几种ELISA 方法有:测定抗体的间接法,测定抗原的双抗体夹心法和测定抗原的竞争法等。本实验采用间接法测定单克隆抗体效价。其主要过程为:首先将已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反应板的凹孔内,加待测抗体,保温后洗涤以除去未结合的杂蛋白质,加酶标抗抗体,保温后洗涤,加底物保温30分钟后,加酸或碱终止酶促反应,用目测或光电比色测定抗体含量。

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2015.06.03

CDK5——调节淋巴管发育的“老司机”

CDK5——调节淋巴管发育的“老司机”近日,国际学术期刊nature communication在线发表了德国科学家的一项最新研究进展,他们发现细胞周期依赖性激酶5(cdk5)对于淋巴管发育具有重要调节作用。 众所周知,淋巴系统对于维持体液平衡,执行免疫监视以及饮食中脂类物质摄取等重要生理功能具有重要作用。同时淋巴管脉系统也参与多种人类疾病过程,淋巴管的形成在慢性炎症和肿瘤扩散过程中都会发生,同时淋巴管功能失调还会造成人类淋巴水肿综合征。但我们对于淋巴管发育及功能发挥过程中的调节机制仍了解较少。 细胞周期依赖性激酶5(cdk5)虽然属于细胞周期依赖性激酶家族,但并不参与细胞周期阶段转换过程,其在中枢神经系统中发挥重要功能,但最近一些研究也发现cdk5功能发挥并不局限于神经系统,其也参与炎症、肥胖、胰岛素抵抗和癌症等疾病过程。但cdk5与淋巴管发育的研究一直是空白。 在该项研究中,研究人员发现细胞周期依赖性激酶5(cdk5)是淋巴管发育过程中一个非常重要的调节因子。研究人员在内皮细胞中特异性敲低cdk5的表达水平能够引起先天性淋巴管功能紊乱以及淋巴水肿。通过对机制进行研究发现,转录因子foxc2是淋巴管脉系统中cdk5的一个关键作用底物,cdk5能够通过对foxc2进行磷酸化调节其活性,从而将cdk5与淋巴管发育和瓣膜形态发生联系在一起。 综上所述,这项研究发现细胞周期依赖性激酶cdk5能够通过调节转录因子foxc2活性参与淋巴管发育和瓣膜形成,对于探究淋巴管发育的调节机制具有一定意义.

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2015.06.03

人血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒

人血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒人血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒仅供体外研究使用检测范围:3.12 ng/ml - 200 ng/ml最低检测限:0.78 ng/mL特异性:人ELISA试剂盒可同时检测重组或天然的人SAA,且与其它相关蛋白无交叉反应。实验原理:用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗SAA抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗SAA抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的SAA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中血清淀粉样蛋白A(SAA)含量。自备物品:1. 微量加液器及吸头,EP管2. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)3. 蒸馏水或去离子水,全新滤纸 标本的采集及保存:1. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。2. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。      3.  细胞培养物上清或其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。洗板方法:1. 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。2. 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。计算:以标准物的浓度为纵坐标(对数坐标),OD值为横坐标(对数坐标),在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析,如curve expert 1.3,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。说明:1. 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染,试剂避免受到微生物的污染,因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。2. 试剂盒保存:短期(1周以内)以标签上的标示为准,长期保存请将试剂全部保存于-20℃。3. 浓洗涤液会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。4. 刚开启的酶联板孔中可能会有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。5. 所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。6. 有效期:6个月。7. 本操作说明适用于48T试剂盒,但48T试剂盒所有试剂减半。

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2015.06.01

疑云重重的“复原性”蛋白质

疑云重重的“复原性”蛋白质过去曾报道过的“幼鼠血液可复原肌肉”的解释受到挑战,有实验室得出与其截然相反的结论……那是一个令人难以置信的观察结果:将一只年幼小鼠和一只年长小鼠的循环系统连接起来之后,年长小鼠似乎得到了复原。这一效应于20世纪50年代被首次发现,自那以后至2015年,有几个研究室都在热切地寻找导致这一效应的分子物质,以期利用它们来减缓甚至逆转人类的衰老。其中一个研究室的成果特别突出:他们在幼鼠的血液中找到一种名为GDF11的蛋白质。而哈佛大学(Harvard University)的一个研究小组则为此发表了好几篇观点鲜明的论文(其中两篇刊登在去年的《科学》(Science)上),称这种蛋白质在年长的动物体内有所减少,这使得它无法对其肌肉、大脑和心脏进行重建。然而,就在本周(2015.5.22),据马萨诸塞州剑桥的诺华生物医学研究院(Novartis Institutes for BioMedical Research)一个研究小组的阐述,他们的结果挑战了GDF11具有复原性的权威说法。其实,诺华小组并非质疑幼鼠的血液能使年长小鼠复原的观点,而是认为哈佛大学研究组对此现象的解释错误。他们的论文发表于《细胞代谢》(Cell Metabolism),主要是质疑哈佛研究组使用较早期的研究结果来进行分析,并提示GDF11实际上抑制肌肉再生。来自渥太华医院研究所(Ottawa Hospital Research Institute)的Michael Rudnicki参与了该论文的附属评论工作,他直率地表示,哈佛研究组的整个研究前提就不是正确的。而其他人则审慎得多,但对于这项新研究部分削弱了原有关于GDF11的主张依然表示同意。比如,来自加利福尼亚州帕洛阿尔托斯坦福大学(Stanford University)的生物学家Thomas Rando就认为,GDF11并非随着动物年龄的增长而下降。哈佛研究组也毫不示弱。其干细胞生物学家Amy Wagers承担了大部分的原始研究工作,她认为诺华仅凭GDF11水平的数据实在是说服力欠缺,并且表示,他们仍然坚信:随着动物年龄的增长,至少有一种形式的GDF11在血液中减少,而对于肌肉健康而言,将GDF11水平维持在适当的生理范围内是很关键的。于是,Wagers以其博士后的身份,与Rando等人合作,开始探索多种以连接不同年龄小鼠的循环系统(这一过程被称为异种共生或并生)来影响衰老进程的方式(Science, 12 September 2014, p.1234)。2013年,她的团队联合心脏病专家Richard Lee所在布莱根妇女医院(Brigham and Women’s Hospital)的实验室,在《细胞》(Cell)上刊登了文章,提出:随着小鼠年龄的增长,其血液中的GDF11水平相应下降,并且他们通过注射的方法(类似于幼鼠-年长小鼠的异种共生)恢复了小鼠的GDF11水平,从而部分逆转与年龄相关的心肌肥厚。去年,Wagers与其合作研究者(包括Lee和哈佛神经科学家Lee Rubin)在《科学》(Science)上发表文章,提出GDF11还能为年长小鼠的大脑血管提供营养,促进神经细胞生长,从而改善它们的嗅觉。而在他们的第二篇《科学》(Science)论文中,Wagers和Lee共同报道了GDF11能刺激年长小鼠受损肌肉的复原,这是因为在它们接受了GDF11之后,在力量及跑步测试中获得了更好的成绩。但是,也有一些专家对这篇有关肌肉复原的论文提出了困惑,因为GDF11是肌肉生长抑制素(myostatin)的一位“近亲”,而后者是一种可控制肌肉生长的蛋白质,此前已有过深入研究:缺乏这种肌肉生长抑制素的动物和人类能长出凸起的大块肌肉,而该物质过量也会抑制肌肉的再生,那么,为何与它极其相似的一种蛋白质却能表现出截然不同的效应呢?来自诺华中心的David Glass是其中一位质疑者,他曾协助开发出一种用于治疗肌肉萎缩的肌肉生长抑制素阻断剂。他的团队通过Wagers曾沿用过的两种分析方法——蛋白质组学分析和商用抗体分析——来测试实验大鼠体内的GDF11水平,却发现无法辨别GDF11和myostatin。于是,他们使用了更具特异性的测试方法,结果发现随着年龄的增长,大鼠和人类血液中的GDF11水平确实有向上的趋势,同时大鼠肌肉中的GDF11 mRNA的水平也随着年龄增长而提升了。诺华研究组还测试了GDF11对肌肉再生的效果。他们做了一个普通的试验:给予一只年幼小鼠GDF11,然后用蛇毒损伤其腿部肌肉。结果,小鼠肌肉的再生受到了削弱。因此,Glass表示,他们的结论是,GDF11似乎对肌肉产生了损害。不过,Wagers仍然坚持自己的数据是正确的。她指出,他们的团队在《科学》(Science)论文中利用了另一种可分辨GDF11和myostatin的抗体,结果发现:随着小鼠年龄的增长,GDF11的水平下降。并且,她还表示,Glass小组的致伤试验与她的研究没有可比性,这是因为对方使用了幼鼠,且给予的GDF11剂量要高三倍(所以说Glass只完成了部分实验,因为他未在年长小鼠中看到Wagers所用剂量产生的任何效应)。Wagers指出,实际上,GDF11所在的信号通路具有“众所周知的剂量敏感性”,在其低剂量和高剂量的不同情况下,会出现截然不同的效应。此外,诺华研究组的肌肉再生测试与她的试验不具可比性——哈佛研究组用冻伤组织的方法来致伤肌肉,此法不大可能会像毒素一样,杀死再生肌肉所必需的肌肉干细胞。此外,Wagers表示,她的团队所获取的新数据将会证明,“对于这个显而易见的矛盾问题,的确有一个非常令人信服的生物学解释。”她的其中一位合作者Lee也对此表示同意。但另一位——Rubin则显得较为审慎,他的意见是:显然应该重视这篇报道。因此,尽管诺华的结果未能成功挑战Wagers团队再次提出的关于GDF11对大脑具有益处的断言,却使得负责牵头这项研究的Rubin表示,他们正在设计一系列的试验来使自己信服:他们在实验鼠大脑中所见的一切都是真理。

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2015.06.01

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