PNAS：性别差异的历史在真核生物中，主要有两种生殖方式，一种是有性生殖，另外一种是无性繁殖。有性生殖大体上应该是真核生物所独有的，而无性繁殖在真核生物中则显得比较意外。美国加州大学欧文分校的研究者，通过分析两种蛋白（HAP2 和GEX1）的同源关系，发现真核生物的性别分化出现的很早，很可能在真核生物的上一个共同祖先中就存在。而且他们认为有性生殖起源于线粒体带来的活性氧自由基的氧化压力相关。针对很多原生动物的研究发现，很多时候我们没有观察到这些真核“微生物”的有性生殖过程。然而，最新的研究认为，我们对于原生动物的理解还很少，例如在引起非洲昏睡病的布氏锥虫上，近年来发现存在着减数分裂，而且其频率要比想象的高。在其他的原生动物研究中，我们也很难观察到有性生殖过程，这是受限于研究方法和这些单细胞生物的生活周期的。大量的基因组测序慢慢开始支持一种观点，即在原生动物中，有性生殖或者两性区别就已经开始出现。研究者基于HAP2 和GEX1进行了同源性分析。HAP2和GEX1都与核融合以及同性配子的互相融合相关，这两种蛋白可能代表了非常古老的有性真核生物的特性。这两种蛋白通过同源分析，发现存在于多种不同的原生动物中，这就说明了原生物就已经开始存在着有性生殖的配子融合过程，因而性别区分出现在了真核生物进化的最初阶段。尽管如此，还存在一些原生动物，确实没有任何与有性繁殖相关的蛋白或者基因，可能它们真的就是无性生殖的。然而有些无性的原生动物，其实很可能是在很近的历史事件中失去了有性的基因，而且伴随有性基因消失的还有线粒体相关的基因。而且在真核生物钟，似乎长时间的无性繁殖对于一个物种是很少见的，而且同源分析告诉我们几乎所有的真核生物都有有性生殖相关的基因，可见性别区分出现的非常早。研究者还试图弄清楚减数分裂（有性生殖方式）的发展过程，他们认为减数分裂可能来自现存真核生物的细胞修复系统。而且之前就有很多研究认为，细胞内的氧化性损伤和真核细胞的减数分裂存在着很多关联性。结合现有的数据，他们还认为，真核生物的有性生殖可能是作为一种细胞的求生系统，来自线粒体的大量的氧活性分子为细胞带来了很大的压力，因此通过这种有性生殖方式可以让细胞以另一种方式继续存活。因此，有性生殖的出现，很可能是与线粒体的内共生起源同步发展起来的。正如中国古代哲学家老子认为的，“道而一，一而二，二而三，三而生万物”，太极为一，阴阳为二，由阴阳配合而生三，就是由阴阳配合可以生出万事万物。数十亿的性别进化，让世界充满了精彩。因为性别的差异，让物种得以长久繁衍，以至万世而不绝。这种性别自然的差异，体现在我们生活方方面面，因此异性之间更需要尊重和理解，也显得更有了科学上证据支持。

人脂肪酸合成酶（FAS）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：                                                          96T0.5nmol/L - 16nmol/L 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中脂肪酸合成酶（FAS）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人脂肪酸合成酶（FAS）水平。用纯化的人脂肪酸合成酶（FAS）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入脂肪酸合成酶（FAS），再与HRP标记的脂肪酸合成酶（FAS）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脂肪酸合成酶（FAS）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人脂肪酸合成酶（FAS）浓度。 试剂盒组成 1   30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶   7   终止液   6ml×1瓶   2   酶标试剂   6ml×1瓶   8   标准品（32nmol/L）   0.5ml×1瓶   3   酶标包被板   12孔×8条   9   标准品稀释液   1.5ml×1瓶   4   样品稀释液   6ml×1瓶   10   说明书   1份   5   显色剂A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2张     6   显色剂B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1个   标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。16nmol/L   5号标准品   150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液   8nmol/L   4号标准品   150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液   4nmol/L   3号标准品   150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液   2nmol/L   2号标准品   150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液   1nmol/L   1号标准品   150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液     2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：  计算  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月 

Nature：艾滋病病毒也挑剔近日，著名国际期刊nature在线发表了意大利科学家的一项最新研究成果，他们发现人类免疫缺陷病毒类型1（HIV-1）倾向于整合在靠近宿主细胞核核孔的核膜区域，选择在这部分区域进行活跃转录的基因进行整合。这项研究或为阻断HIV-1病毒的宿主基因组整合相关研究提供重要线索。人类免疫缺陷病毒（HIV）是一类感染人类免疫系统细胞的慢病毒，属于逆转录病毒的一种，至今仍无有效的治疗方法能够完全治疗这一致命性传染疾病。HIV病毒能够破坏人体免疫力，导致免疫系统失去抵抗力，从而导致各种疾病以及癌症发生，最终使病人免疫系统全线崩溃，获得艾滋病。对于HIV及其他逆转录病毒来说，病毒DNA整合到宿主DNA的过程是它们生命周期中关键性的一步。长期研究表明人类免疫缺陷病毒类型I（HIV-1）倾向于整合在宿主细胞转录活跃的基因区域。但病毒究竟为什么在宿主细胞所有转录活跃的基因中只选择特定的一些基因进行整合，原因仍不清楚。

Nature：为你揭开DNA甲基化及表观遗传学的千古之谜近日，刊登在国际著名杂志Nature上的两篇研究论文中，来自瑞士巴塞尔弗雷德里希米歇尔研究所的研究人员通过研究鉴别出了沿着基因组设置表观遗传学标记的决定因子，研究者表示，基因活性和DNA序列对表观遗传标记的调节作用远比我们之前认识的要重要，基因表达可以通过表观遗传标记被外界的因素所影响。当前对表观遗传比较流行的提法就是我们的经历会对机体基因的活性有一个较长的效应（除了改变DNA序列），而被广为讨论的观点则认为，我们或许有潜力来通过行为改变来控制机体基因的表观遗传标记，当然这种想法的吸引力在于它比较简单，我们的DNA标记是由外界的因素对基因的开启或关闭而产生的；基于这种想法，饥饿、压力、快乐的童年时光、重度吸烟以及健康饮食等诸多因素都会影响基因被调节的方式，然而这种流行的想法很大程度上缺乏令人信服的证据。

人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T10μg/L -240μg/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)水平。用纯化的人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)，再与HRP 标记的胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（480μg/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液：用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。5.培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。6.组织标本:切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。240μg/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液120μg/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液60μg/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液30μg/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液15μg/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月

美国：共享实验室为初创企业保驾护航这非常令人激动，因为我们这里有许多处于创业初期的很酷的公司。千篇一律的窗户、四四方方的砖块外观，这座位于主要街道的建筑，在19世纪可能只是一个仓库或工厂。但这座美国坎布里奇市的地标建筑的历史并不仅仅是生产，还有创新。1867年，它成为Thomas Watson的办公室。当时，Watson担任Alexander Graham Bell的助手，也是他们在波士顿进行了人类历史上第一次长距离双向电话通话。20世纪，这里成了偏振片之家，也是Edwin Land发明拍立得的实验室。现在，一个名为LabCentral的非营利性机构占据了这个创业者摇篮。这个装饰一新的2600平方米的设施目前归麻省理工学院所有，并且租借给了生命科学“孵化器”LabCentral。该机构主要致力于帮助萌芽阶段的生命技术公司战胜波士顿—坎布里奇地区高昂的实验室和设备成本。任何怀揣理想和报负的科学家都能在这里租一个工作台或一个实验室，与其他同样追逐企业家梦想的人分享空间、服务和高成本设备。“这非常令人激动，因为我们这里有许多处于创业初期的很酷的公司。”LabCentral创始人之一、分子生物学家Johannes Fruehauf说。当然，现在也是LabCentral这样的机构的萌芽阶段。坎布里奇、旧金山和其他生命科学企业的“温床”也开设了类似的孵化器，以满足初始企业对办公场所的需求。这些孵化器降低了进入企业的门槛、培养了各种网络，并能向风险投资者和大公司展示这些转瞬即逝的好点子。Extend Biosciences 公司创始人Laura Hales是这里的第一批租客，Hales表示：“如果你要开始与大型制药公司谈判，那么你需要告诉它们你已经成立。任何人一走进这里都会印象深刻。”切身经历LabCentral的设想源于2006年。当时，Fruehauf的博士导师、贝斯以色列女执事医院肠胃病学家Chiang Li开设了Cequent制药公司。依靠2200万美元风险投资，员工从1人骤增至17人，Fruehauf在肯德尔广场选择了一个地方。围绕着麻省理工学院，这里聚集了大量的生物科学公司，号称波士顿的创业超星系团。他成功谈下了实验室的租约、装修和设备等事项，并跳过了一系列令人望而却步的允许和遵从性障碍。但在拿起吸液管前，Fruehauf仍然“烧掉”了150万美元和6个月时间。“回顾往事，那是一个使用金钱和时间的失败案例。”他说。1年后，Li以4600万美元的价格卖掉了Cequent制药公司，而Fruehauf也开设了自己的公司，名为ViThera。由于只有自己口袋里的少量资金，Fruehauf不得不寻找更便宜的方式。于是，他转租了一家位于肯德尔广场的正在裁员的公司的实验室。2011年1月，Fruehauf分拆出一家新公司——坎布里奇生物实验室（CBL），主要为创业企业提供量身定做的最小实验室空间。Olivier Boss是这家公司的第一个顾客。Boss和两个同事开办了Energesis制药公司，开发一种基于褐色脂肪的技术。由于急需实验室，Boss起初先与波士顿大学医学院肥胖症专家Stephen Farmer展开了合作，但得到的实验室只能进行学术研究，为Farmer的研究炮制出大量褐色脂肪干细胞。当然，这一策略是成功的：Boss和Farmer分享了9万美元小企业技术转换（STTR）计划经费。但Boss仍需要进行商业研究。最后，当他在2010年遇到Fruehauf时，找到了“最好的也是唯一的选择”。Fruehauf为Boss提供了一个工作台，并允许其以3000美元一个月的费用使用该公司的设施。Boss接受了这份合同，并在6个月里得到结论，并获得75万美元的STTR经费。3年后，他在租借的CBL的实验室里获得了另外一笔100万美元的经费。没有孵化器，他能做到这些吗？“肯定不能。”Boss说，“我们需要实验室，其他人也需要。”孵化梦想CBL的成功促使Fruehauf寻找其他支持者。他从马萨诸塞州生命科学创新项目获得500万美元，建立了第二个孵化机构LabCentral。这里是科技企业的梦想，LabCentral充满了细胞培养设备、生物安全级别为2的实验室以及令人眼花缭乱的各种细胞、DNA和蛋白质分析工具。一扇崭新玻璃门后面就是“梦想集散地”，这里有洁净的公共区、玻璃墙会议室和储备充足的厨房。为了省钱，许多创始公司甚至分享工作台。而这样的排列就好像信息技术领域的云计算。LabCentral等孵化器实际上是为生物科学研究提供了一个云。“我们致力于打破昂贵实验室资源的羁绊，为创业科学家提供一张促使其奋力前行的信用卡。”加州大学研究机构QB3副总监Douglas Crawford说。QB3为加州大学员工和其他科学家提供位于旧金山海湾地区的孵化地点。另外，这些孵化器提供的不只是实体设备。例如，LabCentral调查了“寄居”在这里的公司的其他需求，找出他们对律师、专利代理和管理服务的需求，然后部分转让解决方案。金融、法律、制药甚至废物处理公司都等在Fruehauf的门外，提供免费或低成本的资金、辅导等服务。一些赞助商认为，如果能尽早且便宜地提供服务，随着这些创业公司的成长和搬离，它们之间的合作关系会进一步加强。此外，羽翼未丰的企业家有什么时间和金钱跋涉在环境健康和安全规范中？“作为一个科学企业家，你的时间应当仅仅集中于你的企业能解决什么问题以及你如何用科学解决它。”三位一体环境公司董事长、执行总裁John McQuillan说。该公司主要为生命科学公司提供建议和废物管理/环境服务。“其他事情都应交给其他人。”McQuillan说。建立网络启动半年后，2014年，LabCentral已经达到饱和。现在，Fruehauf手中有一长串的等待名单。无独有偶，在2013年启动半年后，QB3也在2230平方米的孵化场所中安置了46家公司，大部分公司的职员少于5人。去年，马萨诸塞大学风险发展中心的3个开放实验室区域收到104份申请。由于供不应求，孵化器也开始选择“寄居”企业。在肯德尔广场，第二家为与生命科学相关公司打造的共享实验室空间（“大众创新实验室”）诞生。与LabCentral专门服务于发展早期的公司不同，“大众创新实验室”也欢迎成熟的公司入驻。创始人Amrit Chaudhuri表示，他将致力于在“大众创新实验室”中创造“一个真正独特的生态系统，包括小公司、学术团体和机构、较大的公司以及契约研究组织”。Chaudhuri等人也将考虑在这里提供动物活体研究平台，这样租客就可以在此开展临床前研究。据悉，“大众创新实验室”的办公区域大约有6500平方米，是LabCentral 面积的两倍还多，大约可以入驻100家公司。另外，大企业宣召新点子，孵化器也是便捷的搜寻区域。通过参加孵化器内举办的会谈、研讨会等，大企业能接触到最具吸引力的初创公司，它们可以投资其技术、资助特殊项目，或直接买下该公司。实际上，辉瑞制药就出租了其位于缅因街的部分建筑，并资助了LabCentral，以选择LabCentral两个位置的受助者。LabCentral的租客也相互帮助。例如，Hales与合伙人、病毒学家Tarik Soliman就与处于同一楼层的Advirna公司的研究人员展开合作。两个初创公司联合撰写了小企业创新研究经费申请书，以计划将Extend Biosciences 公司研发的维生素D代谢物添加到Advirna公司的RNA中，以阻止它们在人体内分解。该项目获得了美国国立卫生研究院的资助。也许人们会认为，同样是生物技术领域的公司，这些初创公司极可能是竞争对手。但LabCentral的租客表示，这里的环境更像是一个密切合作的学术实验室。“我以为人们会更神秘，但现在（合作）进展良好。”Ymir基因公司联合创始人Shannon Pendergrast说。目前，LabCentral正在圣迭戈、教堂山和纽约城建立“特许经营”。Fruehauf还与来自欧洲和日本的团体进行了磋商。他梦想建立一个孵化器网络，容纳全美约150家初创企业。

治疗卵巢肿瘤抗体药物单链三特异抗体的研究开发周泽奇，天津国际生物医药联合研究院副院长， 历任美国哈佛大学医学院讲师、美国BAYER公司资深科学家、美国WYETH生物制药公司首席科学家、美国Egenix生物公司常务副总裁兼科学总监。周院长的演讲视频已上传至行云学院供交流学习。据统计，2011年全球治疗性抗体药物销售额超过了568亿美元，2015年有望达到980亿美元左右。市场上的肿瘤治疗性抗体药物全部为单克隆抗体药物或抗体藕联物药物。截止到2012年，美国FDA一共批准了29种抗体药物，其中肿瘤治疗性工程抗体药物12种。经过多年的研发，许多新型工程抗体药物的抗肿瘤效果已经在体内外试验中得到了验证，进入临床试验阶段。预计以抗肿瘤双或三特异抗体药物为代表的新型工程抗体药物将会成为全球抗肿瘤抗体药物重要技术之一。

人RHOA酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T12ng/L -480 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中RHOA 的含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人RHOA 水平。用纯化的人RHOA 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入RHOA，再与HRP 标记的RHOA 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的RHOA呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人RHOA 浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（960ng/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液：用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。5.培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。6.组织标本:切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。480 ng/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液240 ng/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液120 ng/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液60 ng/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液30 ng/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月

人P选择素(P-Selectin/CD62P)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T150ng/L - 5000ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中P 选择素(P-Selectin/CD62P)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人P 选择素(P-Selectin/CD62P)水平。用纯化的人P 选择素(P-Selectin/CD62P)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入P 选择素(P-Selectin/CD62P)，再与HRP 标记的P 选择素(P-Selectin/CD62P)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的P 选择素(P-Selectin/CD62P)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人P 选择素(P-Selectin/CD62P)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（9600ng/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液：用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。5.培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。6.组织标本:切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。4800 ng/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液2400 ng/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液1200 ng/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液600ng/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液300ng/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月

转基因不是缺少美，而是缺少发现转基因话题向来在社会上被争论不休，公众由于对深奥的生物知识了解甚少，通常很难理解转基因产品。美国皮尤研究中心（Pew Research ）的研究结果显示，只有约37%的美国人认为转基因食物是安全的，而美国科学共同体中的科学家认为转基因食物安全的占到88%。最近，初创公司Revolution Bioengineering（RevBio）开发出独特的可以变色的鲜花，在带给公众生活之美的同时也意在帮助人们更好地理解生物工程。该公司的创始人之一Nikolai Braun介绍说，白色的花朵是由于酶的功能缺失而无法产生颜色，他们利用生物开关机制让酶启动，盛开的鲜花便呈现鲜艳的颜色，顾客还可以自己决定何时启动开关让花带有颜色。具体来说，调节产生颜色的通路是花青素调控通路，如果酶缺失，突变或者没有表达，花朵就会呈现白色。研究者在酶基因的上游引入了乙醇诱导的启动子，在浇灌时加入啤酒，花青素合成之后花朵便会改变颜色。而如果使用普通的水来浇灌，酶基因的表达受到抑制，下次开花的时候变回成白色。另一个产品是可以在粉色和蓝色之间变化的牵牛花。这些花中被引入了生物节律调节的启动子，通过改变细胞液泡的pH值来改变花的颜色。这些植物的研发过程一直遵照美国农业部的规定，以避免它们变为有害植物。资金问题一直都是公司两位创始人Havens和Braun的挑战。RevBio在种子阶段的投资主要来自于Indie Bio创业加速器和阿姆斯特丹大学(University of Amsterdam)合作研究的实验室，以及生物公司Integrated DNA Technologies(IDT)的技术捐赠。像现在的大多数研究者，RevBio最后选择了众筹之路。他们在众筹网站IndieGoGo上通过提供产品和生物课程等募集资金。另外他们还开始了与伦敦艺术大学(University of the Arts London)的合作，把科学与艺术相结合呈递给公众。研究变色花之前，Havens和Braun研究的是可以检测爆炸物的植物。在得到了公众积极的反馈之后，他们寻找了更多不同的途径让大家看到生物工程的重要性。而现在他们将继续让人们看到生物工程是如何让世界变得更美。

人CD8分子（CD8）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T2 IU /ml -80 IU /ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中CD8 分子（CD8）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人CD8 分子（CD8）水平。用纯化的人CD8 分子（CD8）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入CD8 分子（CD8），再与HRP 标记的CD8 分子（CD8）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CD8 分子（CD8）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人CD8 分子（CD8）浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（160IU /ml） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液：用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。5.培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。6.组织标本:切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。80 IU /ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液40 IU /ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液20 IU /ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液10 IU /ml 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液5 IU /ml 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月

脑部成像告诉你儿童如何遗传父母的焦虑近日，来自美国威斯康星麦迪逊大学的研究人员利用恒河猴进行研究发现，焦虑性格的父母很可能会产生焦虑性格的孩子。这项研究为了解焦虑和抑郁如何从亲代传递到子代提供了深入见解。 早先的一项研究发现焦虑性格是可以遗传的，并且大脑中一些神经回路也参与其中。参与研究的儿童大多表现出极端的焦虑情绪，并有一半左右的儿童在后来的生活中发生了应激性精神紊乱疾病。猴与人类似，也会表现出性格上的焦虑并可以将焦虑相关基因传递到下一代。 在这项研究中，研究人员对来自同一个大家族的近600只年轻恒河猴进行了研究，结果发现有35％左右的焦虑倾向可通过家族史进行解释。为探究大脑的哪些区域参与了焦虑性格的代代相传，研究人员将年轻的猴置于轻微的应激环境下， 利用高分辨率的功能性和结构性脑成像技术对存在焦虑相关行为的恒河猴的大脑进行了观察，脑部区域代谢出现增强就表明焦虑水平增加。 在对脑功能和焦虑相关行为存在显著差异的不同个体进行了仔细比对之后再结合家族树提示的遗传关系，研究人员发现了负责焦虑相关行为在亲代子代之间传递的脑系统。更为有趣的是，从遗传上与个体早期焦虑性格形成有关的脑神经回路包含了三个与基本存活相关的脑部区域，这三个区域分别位于脑干，杏仁核和前额皮质。 总得来说，这项研究帮助我们更好得了解了焦虑产生过程中脑功能发生的变化，并通过脑部成像技术直观展示了参与焦虑性格遗传的脑部区域，具有一定意义。

慢性疼痛患者的福音近日，来自加州大学戴维斯分校的研究人员发现了神经疼痛的重要机制。他们发现，被称为内质网应激的生物过程，是引起神经疼痛的重要原因。这项发现可能造福于成千上万的慢性疼痛的患者，例如由创伤，糖尿病，带状疱疹，多发性硬化症或导致神经损伤的其他疾病引起的慢性疼痛。相关研究成果于近日发表在PNAS杂志上。最近, 有研究发现, 非通道、非神经递质的疼痛治疗靶点是可溶性环氧化物水解酶(sEH)。这种酶可以降解自然镇痛脂类介质，环氧脂肪酸(EpFAs)。因此，抑制这种酶，可以稳定这些生物活性介质。在本文的研究中，研究人员们发现了EpFAs在糖尿病引起的神经痛中的效应，并确定出一种先前未知的疼痛机制，即被称为内质网应激的生物过程。首先，研究人员们利用大鼠的一型糖尿病模型，量化了外周神经系统激活的内质网应激。接着，他们发现，用一种化学分子伴侣可以缓解疼痛和内质网应激。而且，EpFAs是内质网应激通路上游的调制器。由化学因素引起的疼痛，均可以被化学分子伴侣或者sEH抑制剂所缓解。这种由疼痛诱导剂引起的快速疼痛，以及用阻断剂即可快速缓解的疼痛，和在糖尿病外周神经系统，自然发生的内质网应激，均可以证明，内质网应激通路在调解疼痛系统活性方面的重要作用。这项研究发现阐明了一种神经痛的新机制。根据这项新机制，研究人员将研发出新的阻断内质网应激的药物，进行临床试验。同时，研究人员还将开展基础研究，辨别引起神经痛的不同机制，及新型药物对这些不用种类的神经痛的效果。

Human thymus activation regulatedchemokine (TARC/CCL17)FOR RESEARCH USE ONLYAssay range：12pg/ml - 360pg/ml 96 determinationsPurposeThis kit allows for the determination of TARC/CCL17 concentrations in Humanserum, cell culture supernates and other biological fluidsPrinciple of the assayThe kit assay Human TARC/CCL17 level in the sample, use Purified HumanTARC/CCL17 antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then addTARC/CCL17 to wells, Combined TARC/CCL17 antibody which With HRP labeled, becomeantibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substratesolution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminatedby the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measuredspectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of Human TARC/CCL17in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kit1 wash solution 20ml×1bottle 7 Stop Solution 6ml×1 bottle2 HRP-Conjugate reagent 6ml×1 bottle 8Standard（720pg/ml）0.5ml×1 bottle3 Microelisa stripplate 12well×8strips 9 Standard diluent 1.5ml×1bottle4 Sample diluent 6ml×1 bottle 10 Instruction 15 Chromogen Solution A 6ml×1 bottle 11Closure platemembrane26 Chromogen Solution B 6ml×1 bottle 12 Sealed bags 1IBL2Specimen requirements1. extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t,specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.2. Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.Assay procedure1. Dilute and add sample:Dilute Original density Standard as follow table:360pg/ml 5 Standard 150μl Original density Standard+150μl Standard diluent180pg/ml 4 Standard 150μl 5 Standard+150μl Standard diluent90pg/ml 3 Standard 150μl 4 Standard+150μl Standard diluent45pg/ml 2 Standard 150μl 3 Standard +150μl Standard diluent22.5pg/ml 1 Standard 150μl 2 Standard +150μl Standard diluent2.add sample：Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample andHRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sampledilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold(or 20-fold) wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilledwater and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing bufferto every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well.7.incubate：Operation with 3.8.washing：Operation with 5.9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B 50ul to each well, evadethe light preservation for 10 min at 37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue colorchange to yellow color).311.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution andwithin 15min.Steps descriptionStandard, Sample diluentAdd Standard, Sample diluent, incubate for 30 min at 37℃.Wash 5 time,Add HRP-Conjugate reagent, incubate for 30 min at 37℃.Wash 5 times,Add Chromogen Solution A and B, incubate for 10 min at 37℃.Add Stopp SolutionRead absorbance at 450nm within 15 mincalculateCalculateTake the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the4standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sampleOD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight lineregression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with thesample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor,the result is the sample actual density.Important notes1. The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes inthe room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate shouldbe stored in Sealed bag.2. washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolvewhen dilute . Washing does not affect the result.3. add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids theexperimental error. add sample within 5 min, if the number of sample is much , recommendto use Volley .4. if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the firststandard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilutionfactor.（×n×5）.5. Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6. The substrate evade the light preservation.7. Please according to use instruction strictly, The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8. All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9. Do not mix reagents with those from other lots.Storage and validity1．Storage： 2-8℃.2．validity： six months

Human Total antioxidant status (TAC)ELISA Kit instructionIntended useThe kit uses a double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) toassay the level ofTotal antioxidant status (TAC) in samples.Add standard, test sample and HRP-labeledTotal antioxidant status (TAC) antibodies toenzyme wells which are Pre-coated withcyclic adenosine Total antioxidant status (TAC)antibody, then carry out incubation and wash to remove the uncombined enzyme. Uponadding Chromogen Solution A and B, the color of the liquid will change into blue, and thereaction with the acid will cause the color to become yellow. The depth of color and theconcentration of the Total antioxidant status (TAC) sample are positively correlated.Performance Kit1. Assay range: 7.8ng/ml- 300ng/ml2. Assay method：The kit uses a double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbentassay (ELISA).3. Characteristics ： For quantitative concentration determination in serum, plasma, cellculture supernatant, tissue homogenate and any other biological fluid.4. Accuracy: Standard linear regression correlation coefficient R with the expected value ofthe concentration, greater than or equal to 0.9900.5. Specificity: Cannot be used with other structural analogues in order to avoidcross-reaction.6. Repeatability: The plate coefficient of variation is less than 15%.7. Plate type: Pre-coated, 8*12 strips, 96 wells8. Reliability: Can be performed within two hours. Contrary to traditional Elisa methods,only a single incubation and wash step is required, resulting in fewer handling steps,which reduce errors and deliver more consistent results. Thorough and regular tests of thesystem guarantee a great intra and inter assay reliability and ensure a low coefficient ofvariation.Sample Collection and Storage1. Samples that contain NaN3 cannot be detected, because NaN3 inhibits HRP.2. Serum: During the operation, use non-pyrogenic and endotoxin in vitro, to avoid any cellstimulation, collect blood; centrifuge 3000 rpm for 10 minutes. Carefully separate theserum and red blood cells as quickly as possible. If precipitation appears, centrifuge again.3. Plasma: Use suited EDTA citrate or heparin as an anticoagulant, mix 20 minutes,centrifuge 30minutes at the speed of 3000 rpm, collect supernatant. If precipitationappears, centrifuge again.4. Homogenate: Homogenize with saline buffer and centrifuge for 10minutes at the speed of3000 rpm, then get supernatant for detection.2 / 65. Urine: Collect with sterile container, centrifuge for 20 minutes at 2000-3000 rpm. Collectsupernatant. If precipitation appears, centrifuge again. Use this description to also processhydrothorax and cerebrospinal fluid.6. Cell culture supernatant: When secretory components want to be detected, collect culturemedium with a sterile container, centrifuge for 20 minutes at 2000-3000 rpm, collectsupernatant. When the composition of cells is detected, dilute cell suspension withPBS(pH 7,2-7,4); work with a cell concentration of 1 million cells/ml, repeatedfreeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifuge for20 minutes at 2000-3000 rpm. Collect supernatant. If precipitation appears, centrifugeagain.7. Tissue samples: After cutting samples, check the weight, add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidlyfreeze with liquid nitrogen, keep samples at 2-8℃ after melting, add PBS（PH7.4）,Homogenize by hand or Grinders, centrifuge for 20 minutes at the speed of 2000-3000rpm. Collect supernatant.8. Storage: Serum, plasma, and cell culture fluid samples must be used within 7 days. Maybe stored at 2-8℃, otherwise samples must stored at -20℃(=2months) or -80℃(=6months)to avoid loss of bioactivity and contamination. Avoid freeze-thaw cycles. Whenperforming the assay slowly bring samples to room temperature.DO NOT USE HEAT-TREATED SPECIMENS.Materials Required but not Supplied1. Standard micro-plate reader (450nm).2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.3. 37 ℃ incubator.4. Distilled or de-ionized water.5. Data analysis and graphing software.6. Tubes to prepare standard or sample dilutions.7. Adjustable 10ml -100ml pipettes for reagent preparation.8. 100 ml and 1 liter graduated cylinders.9. Absorbent paper.Warnings and Precautions1. The kit contains material and a small amount of sodium azide. Avoid contact with eyes,skin and mucous membrane. In case of contact, wash affected area with plenty of water.2. Bring kit components out of the fridge for at least 30minutes before its use. If the Enzymecoated plates are not used immediately after being opened, the remaining plates should bestored in a sealed bag. The concentrated washing liquid, which was removed from therefrigerator, may contain some crystals. This is a normal phenomenon. Please completelydissolve before used.3. The operation should be carried out in strict accordance with the instructions. Test resultsmust be based on the readings of the Enzyme reader.4. For each step, add sample by using a pipette, which should be calibrated frequently, inorder to avoid unnecessary experimental errors.3 / 65. In order to avoid cross-contamination, it is forbidden to re-use the tips and seal platemembrane with your hands.6. All liquid components should be well mixed before its use.7. Samples should be collected in pyrogen/endotoxin-free tubes.8. Samples should be frozen if not analyzed shortly after collection. Avoid multiplefreeze-thaw cycles of the samples. Thaw completely and mix well prior to analysis.9. When possible, avoid use of badly hemolyzed or lipemic sera. If large amounts ofparticulates are present, centrifuge or filter prior to analysis.10. It is recommended that all standards, controls and samples be run in duplicate.11. The idle reagents shall be put up or covered. Do not use reagents with different batches,and use them before expired date.12. Read absorbances within 2 hours of assay completion.13. The substrate B is light sensitive. Avoid prolonged exposure to light. Also avoid contactbetween Stabilized Chromogen and metal.14. All samples, washing buffer and each kind of waste should be processed according toinfective material procedures.Materials SuppliedREAGENTS(store at 2-8℃) 1×96WELLS RECONSTITUTION96 wells miorou 12*8strips Ready to useStandard（300ng/ml） 0.6ml Dilute according to instructionsStandard diluent 6.0ml Ready-to-useSample diluent 6.0ml Ready-to-useHRP-Conjugate reagent 6.0ml Ready-to-use20X Wash solution 20ml Dilute according to instructionsChromogen Solution A 6.0ml Ready-to-useChromogen Solution B 6.0ml Ready-to-useStop Solution 6.0ml Ready-to-useMicroplate Sealers 2 Ready-to-useUser manual 1 Ready-to-useSealed bags 1 Ready-to-useNote: Dilute the Standard with Standard diluents, as follows: 300、150、75、32.5、15.6、0ng/mlReagent Preparation20 × dilution of washing buffer: distilled water, diluted by 1:20, or 1 copy of the 20 × washingbuffer plus 19 copies of the distilled waterWashing Method：Manually washing method: Empty the plate by inverting it and shaking the content out overthe sink, and tap it on the absorbent papers to dry. Add at least 0.35ml washing solution 1xinto each well, and soak the plate for 1~2 minutes. Repeat this process 5 times.4 / 6Automatic washing method: If there is an automatic washing machine, it should only be usedin the test when you are quite familiar with its function and performance.Operation Steps1. The quantity of the strips depends on the quantity to-be-tested samples and the standards.It is suggested to duplicate each standard and blank well. Every sample should be madeaccording to your required quantity, and try to use the duplicated wells for samples aswell.2. Set blank wells, standard wells, and test sample wells respectively:(1) Blank wells: do not add samples and horseradish peroxidase (HRP), other operationsare the same.(2) Standard wells: Add standard 50μl to Standard wells.(3) Test sample wells: Add 40μl of sample diluent and then add 10μl of undiluted testingsample (sample final dilution factor is 5).(4) Add 50μl of horseradish peroxidase (HRP) into each well, except blank well. Then sealthe plate, and gently shake, then incubate 60 minutes at 37 ℃.3. Discard Liquid excess, drying, fill each well with diluted washing liquid, mix and shakefor 30 seconds, discard the washing liquid and tap the plate into absorbent papers to dry.Repeat five times, and then pat dry.4. Add 50μl of chromogen solution A to each well, and then add 50μl of chromogen solutionB to each well. Gently shake and incubate for 10 minutes at 37℃ away from light.5. Stop: Add Stop Solution 50μl into each well to stop the reaction (the blue changes intoyellow immediately).6. Final measurement: Take blank well as zero, measure the optical density (OD) at 450 nmwavelength which should be carried out within 15 minutes after adding the stop solution.7. According to standards’ concentration and the corresponding OD values, calculate out thestandard curve linear regression equation, and then apply the OD values of the sample onthe regression equation to calculate the corresponding sample’s concentration. It isacceptable to use a variety of software to make calculations.5 / 6Summary ProceduresPrepare reagents, samples and standardAdd prepared sample and standard and HRP-Conjugate Reagent, incubate for 60 minutes at 37 ℃Wash plate five times and add Chromogen Solution A and B, incubate for 15 minutes at 37 ℃Add stop solutionMeasure within 15minutesCalculationDetermining the Results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standardcurve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the sixstandard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentrationon the horizontal (X) axis.2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, aresubtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Constructthe standard curve using graph paper or statistical software..3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis andextend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a verticalline to the X-axis and read the corresponding concentration.4. Any variation in the operator, pipetting and washing technique, incubation time ortemperature, and kit age can cause a variation in the result. Each user should obtain theirown standard curve.6 / 6Package size: 96 determinationsStorage： 2-8℃.Validity： Six monthsPLEASE CAREFULLY READ THIS INSTRUCTION MANUAL BEFORE USE.TO BE USED ONLY FOR RESEARCH PURPOSES, NOT TO BE USED FORMEDICAL DIAGNOSIS

利用CRISPR/CAS9对人类干细胞系进行可诱导基因敲除近日，来自美国威斯康星大学的华人科学家Su-Chun Zhang在国际学术期刊Cell Stem Cell发表了一项最新研究进展，他们利用CRISPR/CAS9技术实现了对人类干细胞系进行可诱导基因敲除，这一方法的成功对于研究基因在干细胞及分化不同阶段中的作用具有重要推动作用。对基因表达进行精确的时间调控对于阐明一个基因在生物学系统中的功能至关重要，但到目前为止，在人类多能干细胞中实现可诱导基因敲除，建立可诱导基因敲除的人类干细胞系仍存在很大挑战。在该项研究中，研究人员结合CRISPR/CAS9介导的基因组编辑和Flp/FRT以及Cre/LoxP系统成功实现建立了可诱导基因敲除的人类多能干细胞系。研究人员发现dual-sgRNA的靶向作用对于将FRT序列进行精确的双等位基因敲入非常重要。除此之外，他们还开发了出一种新的策略将一个可调控活性的重组酶表达体系同时导入细胞，移除了药物抗性基因，利用这种方法可以加快iKO hPSC细胞系的获得速度。研究人员通过这种两步法敲除策略，对人类胚胎干细胞和诱导多能干细胞中的SOX2,PAX6,OTX2,AGO2等基因实现了可诱导性基因敲除，建立了相关细胞系。研究人员相信，利用这种方法建立iKO hPSC细胞系将会改变人们以往对人类细胞中基因功能研究的方式，对于推动干细胞研究进展具有重要意义。

Rat Interleukin6 (IL-6)ELISA KitFOR RESEARCH USE ONLYINTRODUCTIONAssay range：3pg/ml-120pg/ml 96 determinationsPurposeThis kit allows for the determination of IL-6 concentrations in Ratserum, cell culture supernates and other biological fluidsPRINCIPLE OF TESTThe kit assay Rat IL-6 level in the sample, use Purified Rat IL-6 antibodyto coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add IL-6 to wells,Combined IL-6 antibody which With HRP labeled, become antibody - antigen -enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substratesolution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed,reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the colorchange is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. Theconcentration of Rat IL-6 in the samples is then determined by comparing theO.D. of the samples to the standard curve.COMPOSITION OF THE KIT1 wash solution 20ml×1bottle 7 Stop Solution 6ml×1 bottle2 HRP-Conjugatereagent 6ml×1 bottle 8Standard（240pg/ml） 0.5ml×1 bottle3 Microelisa stripplate 12well×8strips 9 Standard diluent 1.5ml×1bottle4 Sample diluent 6ml×1 bottle 10 Instruction 15 Chromogen SolutionA 6ml×1 bottle 11 Closure platemembrane 26 Chromogen SolutionB 6ml×1 bottle 12 Sealed bags 1IBL International GmbHFlughafenstra?e 52a 22335 Hamburg DE2SAMPLE PREPARATION1. extract as soon as possible after Specimen collection,and according to therelevant literature, and should be experiment as soon as possible after theextraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoidrepeated freeze-thaw cycles.2. Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRPactive.ASSAY PROCEDURE1. Dilute and add sample:Dilute Original density Standard as follow table:120pg/ml5 Standard 150μl Original density Standard+150μl Standard diluent60pg/ml 4 Standard 150μl 5 Standard+150μl Standard diluent30pg/ml 3 Standard 150μl 4 Standard+150μl Standard diluent15pg/ml 2 Standard 150μl 3 Standard +150μl Standard diluent7.5pg/ml 1 Standard 150μl 2 Standard +150μl Standard diluent2.add sample：Set blank wells separately (blank comparison wells don’t addsample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same).testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then addtesting sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells ,don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold(or 20-fold) wash solution diluted 30-fold (or 20-fold)with distilled water and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing,add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry byIBL International GmbHFlughafenstra?e 52a 22335 Hamburg DE3pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blankwell.7.incubate：Operation with 3.8.washing：Operation with 5.9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B 50ul toeach well, evade the light preservation for 10 min at 37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(theblue color change to yellow color).11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after AddingStop Solution and within 15min.Steps descriptionStandard, Sample diluentAdd Standard, Sample diluent, incubate for 30 min at 37℃.Wash 5 time,Add HRP-Conjugate reagent, incubate for 30 min at 37℃.Wash 5 times,Add Chromogen Solution A and B, incubate for 10 min at 37℃.IBL International GmbHFlughafenstra?e 52a 22335 Hamburg DE4Add Stopp SolutionRead absorbance at 450nm within 15 mincalculateCALCULATION OF RESULTTake the standard density as the horizontal, the OD value for thevertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the correspondingdensity according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied bythe dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of thestandard curve with the standard density and the OD value ,with the sampleOD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by thedilution factor, the result is the sample actual density.IMPORTANT NOTES1. The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced15-30 minutes in the room temperature, ELISA plates coated if has not useup after opened, the plate should be stored in Sealed bag.2. washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the waterhelps dissolve when dilute . Washing does not affect the result.3. add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently,avoids the experimental error. add sample within 5 min, if the number ofIBL International GmbHFlughafenstra?e 52a 22335 Hamburg DE5sample is much , recommend to use Volley .4. if the testing material content is excessively higher (The sample OD isbigger than the first standard well ),please dilute Sample (n-fold), Pleasediluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.5. Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoidcross-contamination.6. The substrate evade the light preservation.7. Please according to use instruction strictly, The test result determinationmust take the microtiter plate reader as a standard.8. All samples, washing buffer and each kind of reject should according toinfective material process.9. Do not mix reagents with those from other lots.STORAGE CONDITIONS? The unopened kit shall be stored at [2-8 ℃] .? For opened kit can be stored at [2-8 ℃] for up to 1 month. If not be usedrecently, the standard should be kept in -20 ℃.? validity： six months

Rat IL-1FOR RESEARCH USE ONLYCATALOG #:R7468Assay range：8ng/L-180ng/L 96 determinationsPurposeThis kit allows for the determination of IL-1 concentrations in Rat serum, cell culturesupernates and other biological fluidsPrinciple of the assayThe kit assay Rat IL-1 level in the sample ， use Purified Rat IL-1 antibody to coatmicrotiter plate wells, make solid-phase antibody, then add IL-1 to wells, Combined IL-1antibody which With HRP labeled,become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, afterwashing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRPenzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and thecolor change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. Theconcentration of Rat IL-1 in the samples is then determined by comparing the O.D. of thesamples to the standard curve.Materials provided with the kit1 wash solution 20ml×1bottle 7 Stop Solution 6ml×1 bottle2 HRP-Conjugate reagent 6ml×1 bottle 8 Standard（360ng/L） 0.5ml×1 bottle3 Microelisa stripplate 12well×8strips 9 Standard diluent 1.5ml×1bottle4 Sample diluent 6ml×1 bottle 10 Instruction 15 Chromogen Solution A 6ml×1 bottle 11 Closure platemembrane 26 Chromogen Solution B 6ml×1 bottle 12 Sealed bags 1Specimen requirementsPO Box 540279 Waltham, MA 02451 USA21. extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t,specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.2. Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.Assay procedure1. Dilute and add sample:Dilute Original density Standard as follow table:180ng/L 5 Standard 150μl Original density Standard+150μl Standard diluent90ng/L 4 Standard 150μl 5 Standard+150μl Standard diluent45ng/L 3 Standard 150μl 4 Standard+150μl Standard diluent22.5ng/L 2 Standard 150μl 3 Standard +150μl Standard diluent11.25ng/L 1 Standard 150μl 2 Standard +150μl Standard diluent2.add sample ： Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample andHRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sampledilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold(or 20-fold) wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilledwater and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing bufferto every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well.7.incubate：Operation with 3.8.washing：Operation with 5.9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B 50ul to each well, evadethe light preservation for 10min at 37℃10.Stop the reaction： Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue colorPO Box 540279 Waltham, MA 02451 USA3change to yellow color).11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution andwithin 15min.Steps descriptionStandard, Sample diluentAdd Standard, Sample diluent, incubate for 30 min at 37℃.Wash 5 time,Add HRP-Conjugate reagent, incubate for 30 min at 37℃.Wash 5 times,Add Chromogen Solution A and B, incubate for 10 min at 37℃.Add Stopp SolutionRead absorbance at 450nm within 15 mincalculatePO Box 540279 Waltham, MA 02451 USA4CalculateTake the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw thestandard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sampleOD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight lineregression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with thesample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor,the result is the sample actual density.Important notes1. The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes inthe room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate shouldbe stored in Sealed bag.2. washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolvewhen dilute . Washing does not affect the result.3. add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids theexperimental error. add sample within 5 min, if the number of sample is much , recommendto use Volley .4. if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the firststandard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilutionfactor.（×n×5）.PO Box 540279 Waltham, MA 02451 USA55. Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6. The substrate evade the light preservation.7. Please according to use instruction strictly, The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8. All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9. Do not mix reagents with those from other lots.Storage and validity1．Storage： 2-8℃.2．validity： six months

姜黄素或可有效抵御恶性间皮瘤的发展千百年来美食爱好者一直钟情于食物丰富的颜色、辛辣的味道以及阵阵香气，而如今研究者发现姜黄根或可帮助抵御癌症；近日来自弗林德斯大学的研究人员通过研究调查了是否将黄根的有效成分姜黄素可以独立或结合标准疗法来帮助治疗恶性间皮瘤，这是一种因吸入石棉而引发的恶性癌症。恶性间皮瘤是一种围绕在肺部、心脏及腹部内部器官表面的薄膜性肿瘤，当前并没有有效疗法来治疗这种癌症。研究者Sonja Klebe教授说道，标准的化疗方法成功率有限，而根治性的手术也仅适用于很少一部分患者，而且并不能保证每次都成功。恶性间皮瘤患者诊断后的平均生存时间不到一年，当前治疗该患者的疗法往往使患者非常痛苦。长期以来姜黄素被认为具有明显的抗炎效应，而且近来研究者发现姜黄素具有抗癌特性，其可以帮助克服癌细胞对化疗的耐药性；此前在实验室中研究者利用姜黄素成功抑制了动物模型细胞中间皮瘤的生长，而如今研究者利用姜黄素可以成功抑制人类机体中间皮瘤的发展，这或许就可以帮助预测是否患者会得益于这种新型的姜黄素疗法。另外研究者还发现姜黄素会影响肿瘤的血液供给，从传统意义上来讲，新生血管被认为可以从围绕在肿瘤周围存在的间质血管中发芽生成，而血管内皮生长因子则可以促进该过程的发生，同时间皮细胞还可以展现血管内皮生长因子受体，截至目前为止，靶向作用血管内皮生长因子的药物依然没有取得治疗上的成功。研究者Klebe说道，本文中我们首次发现间皮瘤细胞自身可以形成3维的导管，这或可帮助解释标准药物治疗效果较差的原因，即标准药物并不能靶向作用不同类型肿瘤血管的生成；研究者认为，姜黄素在间皮瘤中血管发生中扮演着重要角色，尤其是姜黄素对于肿瘤的生长具有直接的效应。姜黄素通常以口服药片的形式呈现，实际上其并没有任何副作用，还可以单独用于治疗患者，来帮助患者机体有效抵御癌细胞耐药性的产生，当然姜黄素还可以结合其它疗法来帮助改善机体对疗法的反应，并且降低标准化药物的用量，从而最终改善患者的生活质量。

首次发现感染沃尔巴克氏属细菌的雄性果蝇攻击性减弱感染了沃尔巴克氏体属细菌雄性果蝇比没有感染该细菌的果蝇的攻击性弱。这项研究首次证明了细菌影响果蝇的攻击性，Jeremy C. Brownlie博士说。雄性果蝇之间通常相互斗殴，但是接受过处理昆虫训练的研究员Bondy注意到感染特定菌株（沃尔巴克氏体属）的雄性果蝇的攻击性不及未感染的同类攻击性强。所以Bondy在实验室安置了一个摄像机来记录实验过程。研究人员设定了三个参数来衡量果蝇的攻击性强弱：引发攻击的时间长短，参与攻击的总次数，平均攻击一次的持续时间。研究人员比较了受感染果蝇，未感染果蝇，曾受感染已被治愈的果蝇之间的攻击行为。受感染的果蝇比其它组能多花三倍的时间来发起第一次攻击行为，而且在多数攻击行为中只参与一半的攻击。然而，受感染的果蝇的攻击持续时间与未受感染果蝇是一样的。该研究表明果蝇的攻击性减弱不是由于疾病的原因Brownlie博士说。研究者还测量了果蝇的神经递质，羟苯乙醇胺等物质含量，它们可以调节果蝇的攻击性。正如所料，受感染的果蝇产生的该类物质比未感染的同类要少。他们也发现编码羟苯乙醇胺的酶的两个基因的表达量减少，该发现表明沃尔巴克氏体属细菌可直接影响果蝇基因功能。”Brownlie博士说。沃尔巴克氏体属菌感染至少40%的昆虫和其它无脊椎动物，但它们不感染脊椎动物。这些细菌利用宿主自我复制并传播到宿主的后代，而且它们还可以改变性别。它们被证明能影响宿主的代谢途径，可以保护宿主免受病原体侵袭，可以影响宿主寿命，甚至在物种形成中产生作用，Brownlie说。对于科学家而言，细菌影响攻击性充其量像某种基因突变一样，应被视为一种行为改变的信号，不一定要归因于遗传学-Brownlie说。从昆虫到人类的推断虽然很理想化，但是该新发现暗示肠道细菌也可能有类似的对人类行为的影响。

大鼠雌激素（E）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：                                                          96T2.5 ng/L -80 ng/L 使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中雌激素（E）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠雌激素（E）水平。用纯化的大鼠雌激素（E）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入雌激素（E），再与HRP标记的雌激素（E）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的雌激素（E）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠雌激素（E）浓度。 试剂盒组成 1   30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶   7   终止液   6ml×1瓶   2   酶标试剂   6ml×1瓶   8   标准品（160 ng/L）   0.5ml×1瓶   3   酶标包被板   12孔×8条   9   标准品稀释液   1.5ml×1瓶   4   样品稀释液   6ml×1瓶   10   说明书   1份   5   显色剂A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2张     6   显色剂B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1个   标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。80 ng/L   5号标准品   150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液   40 ng/L   4号标准品   150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液   20 ng/L   3号标准品   150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液   10 ng/L   2号标准品   150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液   5 ng/L   1号标准品   150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液     2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：  计算  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月 

大鼠雌二醇受体(ER)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T1ng/L -40 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中雌二醇受体(ER)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠雌二醇受体(ER)水平。用纯化的大鼠雌二醇受体(ER)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入雌二醇受体(ER)，再与HRP 标记的雌二醇受体(ER)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的雌二醇受体(ER)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠雌二醇受体(ER)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（64 ng/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。32 ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液16 ng/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液8 ng/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液4 ng/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液2ng/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月

为何男人的精子会在一生中源源不断地产生？长期以来机体持续产生精子对于繁衍后代非常关键；近日，发表在国际杂志Development上的一篇研究论文中，来自日本国家基础生物学研究所的研究人员通过研究揭示了为何机体会持续产生精子，研究者Shosei Yoshida教授表示，精原干细胞对于类维生素A的反应存在一定的差异，而这种差异是机体精子持续产生的关键因子。在哺乳动物睾丸中，精子在大部分雄性的一生时光中都会源源不断地产生，精原干细胞就是未成熟的生殖细胞，其会通过细胞分裂增加，同时会分化成为成熟的精子；为了能够持续产生精子，维持干细胞的数量和诱发向精子的分化之间的平衡非常关键。如果太多干细胞分化成为精子，那么精子发生将会最终被耗竭，而如果太多干细胞进行自我更新，睾丸就会充满未成熟的精子细胞。在果蝇的睾丸中，其精原干细胞位于睾丸中的特殊微环境中，该环境名为“干细胞生境”，干细胞通常会被生境的功能所维持，一旦其离开微环境其就会分化成为精子，然而在哺乳动物的睾丸中尚没有发现可以维持精原干细胞的特殊干细胞生境，而且所发现的干细胞都被具有活性可以进行迁移，因此目前研究者并不清楚，哺乳动物的睾丸如何保持干细胞数量同诱导干细胞向精子分化过程之间的精细平衡。文章中研究者发现精原干细胞依赖于不同的细胞亚型对类维生素A会产生反应性的差异，尽管所有的精原干细胞都会平等地“沐浴”在类维生素A中，但其会诱导一些但并不是所有的干细胞进行分化，随后研究者发现，精原干细胞对类维生素A的反应差异仅可以被其是否表达Rarγ基因所控制，Rarγ基因是一种类维生素A受体。

胰腺癌突破性进展：将癌细胞转变为正常细胞一项新的研究发现，胰腺癌细胞可以通过过表达一个名为E47的蛋白，从而被诱导转变回正常的细胞。E47可以与特定的DNA序列结合，来控制掌管生长和分化的一些基因。这项研究为美国每年超过4万死于胰腺癌的患者们提供了拥有新治疗方法的希望。"这是第一次，我们发现过表达一个基因，就可以降低胰腺腺癌细胞促进肿瘤发展的潜在性，通过将这些癌症细胞重新编程回它们原始的细胞类型。因此，胰腺细胞保留有基因记忆，我们希望可以开发利用。"Sanford-Burnham发育，衰老和再生项目的兼职教授Pamela Itkin-Ansari说，她也是这项研究的主要作者。此研究在于4月20日发表在Pancreas杂志上。

大鼠β位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：                                                          48T2U/L - 80 U/L 使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中β位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠β位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）水平。用纯化的大鼠β位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1），再与HRP标记的β位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的β位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠β位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）浓度。 试剂盒组成 120倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液3ml×1瓶2酶标试剂3ml×1瓶8标准品（160U/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×4条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液3ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液3ml×1瓶11封板膜2张  6显色剂B液3ml×1/瓶12密封袋1个标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。80 U/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液40 U/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液20 U/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液10 U/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液5 U/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液  2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：  计算  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月 

大鼠α 干扰素(IFN-α)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T1.5ng/L -40ng/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中α 干扰素(IFN-α)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠α 干扰素(IFN-α)水平。用纯化的大鼠α 干扰素(IFN-α)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入α干扰素(IFN-α)，再与HRP 标记的α 干扰素(IFN-α)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的α 干扰素(IFN-α)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠α 干扰素(IFN-α)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（80ng/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。40ng/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液20ng/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液10ng/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液5ng/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液2.5ng/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月

睡眠不足的危害你是否有过白天很瞌睡，可是到了晚上却很精神的感觉，总感觉到了晚上都跟睡觉有仇似的，那么睡眠不足会对我们的身体有哪些危害呢，今天一起来给大家解读一下。

细胞治疗实验室创新管理模式探索与实践在2014细胞治疗国际研讨会上，张教授做了精彩演讲，演讲主题：细胞治疗实验室创新管理模式探索与实践。张桂荣，现担任辽宁省肿瘤医院生物治疗研究中心主任，辽宁省肿瘤分子靶标重点实验室主任，辽宁省肿瘤医院中心实验室副主任，张教授的演讲视频已上传至行云学院供交流学习。标准操作流程（SOP）的建立鉴于细胞治疗实验室生产全过程，与药品生产质量管理规范（GMP）没有本质上的区别，借鉴GMP多年、成型的管理经验与模式，结合细胞治疗实验室自身的特点，建立适合开展体细胞免疫治疗技术的SOP是非常必要的。无菌操作培训→规范化操作演练→SOP建立与执行→监督管理措施到位→全程质量控制→增强社会效益。规模化生产的系列措施随着临床治疗刚性需求的增长，细胞培养的工作量不断增加，细胞培养师及工作面积趋于紧张，优化实验流程→发明、创新器材（专利技术）→解放生产力→建立弹性工作制（减少设备与实验室面积占用）→提高经济效益。信息化管理将现代信息技术与细胞生产先进的管理理念相融合，转变传统管理方式和生产方式，实现细胞生产的全程质量控制，增强科室的核心竞争力。科室文化的建立众所周知文化管理是人本管理的最高层次，是一种“以人为本”的管理模式。通过征集科训→开展丰富多彩的活动→实施健康宣传教育，实现文化管理的导向作用、激励作用、凝集作用、塑造作用和辐射作用。以上作用的实现，形成了良好的科室品牌效应，促进社会效益和经济效益不断攀升的背后科室文化功不可没。管理的成长阶梯强制管理→制度管理→文化管理→无为而治。君闲臣忙国必治，君忙臣闲国必乱。 君无为，而臣有为也。 展望与未来。虽然细胞治疗行业目前国家没有出台具体的管理措施，但借鉴相关行业标准，我们认为通过行业自律，行业共同努力，细胞治疗质量管理规范与细胞治疗实验室质量管理规范应尽早出台，使我国细胞治疗事业朝着制度化、规范化、标准化乃至法制化的方向发展。

大鼠Ⅰ型胶原N末端肽（NTX）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T0.5nmol/L - 17nmol/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中Ⅰ型胶原N 末端肽（NTX）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠Ⅰ型胶原N 末端肽（NTX）水平。用纯化的大鼠Ⅰ型胶原N 末端肽（NTX）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Ⅰ型胶原N 末端肽（NTX），再与HRP 标记的Ⅰ型胶原N 末端肽（NTX）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ⅰ型胶原N 末端肽（NTX）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠Ⅰ型胶原N 末端肽（NTX）浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（32nmol/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。16nmol/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液8nmol/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液4nmol/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液2nmol/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液1nmol/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、2待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用。5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟。10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的3OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月4Human NTXFOR RESEARCH USE ONLYAssay range：1 nmol/L -24nmol/L 96 determinationsPurposeThis kit allows for the determination of NTX concentrations in Human serum, cellculture supernates and other biological fluidsPrinciple of the assayThe kit assay Human NTX level in the sample，use Purified Human NTX antibody tocoat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add NTX to wells, Combined NTXantibody which With HRP labeled goat anti-Human become antibody - antigen -enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution, TMBsubstrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the additionof a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at awavelength of 450 nm. The concentration of Human NTX in the samples is then determined bycomparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kit1 wash solution 20ml×1bottle 7 Stopp Solution 6ml×1 bottle2 HRP-Conjugate reagent 6ml×1 bottle 8Standard（48nmol/L）0.5ml×1 bottle3 Microelisa stripplate 12well×8strips 9 Standard diluent 1.5ml×1bottle4 Sample diluent 6ml×1 bottle 10 Instruction 15 Chromogen Solution A 6ml×1 bottle 11Closure platemembrane26 Chromogen Solution B 6ml×1 bottle 12 Sealed bags 1Specimen requirementsRD51. extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t,specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.2. Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.Assay procedure1. Dilute and add sample:Dilute Original density Standard as follow table:24nmol/L 5 Standard 150μl Original density Standard+150μl Standard diluent12nmol/L 4 Standard 150μl 5 Standard+150μl Standard diluent6nmol/L 3 Standard 150μl 4 Standard+150μl Standard diluent3nmol/L 2 Standard 150μl 3 Standard +150μl Standard diluent1.5 nmol/L 1 Standard 150μl 2 Standard +150μl Standard diluent2.add sample：Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample andHRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sampledilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water andreserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing bufferto every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well.7.incubate：Operation with 3.8.washing：Operation with 5.9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade thelight preservation for 15 min at 37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue colorchange to yellow color).11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and6within 15min.Steps descriptionStandard, Sample diluentAdd Standard, Sample diluent, incubate for 30 min at 37℃.Wash 5 time,Add HRP-Conjugate reagent, incubate for 30 min at 37℃.Wash 5 times,Add Chromogen Solution A and B, incubate for 30 min at 37℃.Add Stopp SolutionRead absorbance at 450nm within 15 mincalculateCalculateTake the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw thestandard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sampleOD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line7regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with thesample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor,the result is the sample actual density.Important notes1. The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes inthe room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate shouldbe stored in Sealed bag.2. washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolvewhen dilute . Washing does not affect the result.3. add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids theexperimental error. add sample within 5 min, if the number of sample is much , recommendto use Volley .4. if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the firststandard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilutionfactor.（×n×5）.5. Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6. The substrate evade the light preservation.7. Please according to use instruction strictly, The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8. All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9. Do not mix reagents with those from other lots.Storage and validity1．Storage： 2-8℃.2．validity： six months.

中国的H7N9流感病毒Yi Guan及同事对H7N9流感病毒2013年第二轮爆发期间的演变和传播情况进行了追踪。他们提供了来自从2013年10月到2014年7月在中国全国范围内所进行的流感监测期间收集到的分离毒株的大量新的H7N9病毒序列。他们发现，该病毒已分化成截然不同的分支，已在鸡身上安营扎寨，并且已经传播到了更大的地域范围。H7N9病毒在中国流感生态系统中扎根的方式强烈显示，这种病毒应当作为有可能对人类造成疫情的一个首要病毒种类加以考虑。