小鼠VI型胶原(COL6)ELISA试剂盒

本试验采用改良过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记在抗体上[1]，小鼠VI型胶原(COL6)ELISA试剂盒标记完后取上清用Sephedex G200 凝胶层析进行纯化，洗脱液为0.2mol/L pH7.4的PBS，流速为15ml/h，分步收集，每支3ml，以紫外分光光度计测A280吸光度值，以洗脱体积为横坐标，吸光值为纵坐标做图，收集第一峰即为酶标抗体峰。

标记完后用紫外分光光度计在分别在280nm、及403nm处测定酶标记物的A值，计算免疫球蛋白量、摩尔比值、酶结合率以及标记率。

1.2 包被用缓冲液及最适包被抗原浓度的优化

1.2.1 包被缓冲液的优化

小鼠VI型胶原(COL6)ELISA试剂盒包被抗原时，为了得到最佳的包被效果，我们采用了碳酸盐缓冲液（50mM ph9.6 ）、磷酸盐缓冲液（50mM ph7.6）、以及TRIS盐酸缓冲液（50 mM ph7.6）三种缓冲液作为包被液，抗原包被浓度为5ug/ml，及2.5ug/ml,酶标抗体工作浓度为1：400及1：300，用自动酶标仪分析，选择最佳的包被缓冲液系统。同时为了保证缓冲液能够长期保存，我们在包被液中添加了0.01%的硫柳汞作为防腐剂。

临床考核血清盘的制备要求 1、 采用人的原血清； 2、 血清盘应具有相应的稳定性； 3、 血清盘中样本不含防腐剂，或只含极微量的、不影响检验结果的防腐剂； 4、 血清盘所包含的阴性样本和阳性样本约各占一半； 5、 阳性样本中，应有一定数量的强阳性和弱阳性样本； 6、 血清盘中应有一定数量的临界值上、下含量的样品，以检验试剂的灵敏度。 7、 血清盘中应包含与该项检验相关的病种样本和已积知具有干扰物质（RF因子）的样本，小鼠VI型胶原(COL6)ELISA试剂盒以检验试剂的特异性。

正态分布及标准差 ELISA试验中，检验同一样本达20次以上时，就会发现这组数据（指测定结果的吸光值）分布在均值两侧，大部分集中在均值附近。如果以测定值为横坐标，以出现的频率为纵坐标作图，就可绘出一个呈钟形的曲线图。如图5-1，钟顶处为均值，其他值以均值为中心对称分布，这就是正态分布。 正态曲线以下的面积称概率，常用样本的均数（X）和标准差（SD）来表示，其计算方法如下：小鼠VI型胶原(COL6)ELISA试剂盒均值、标准差和概率的关系如下： 　　X±1SD，概率0.68　　　　X±2SD，概率0.95　　　　X±3SD，概率0.99 换言之，当ELSIA检测同一样本达一定次数后所得的一组数据，其中靠近均值（X）的±1SD范围内的数据，占该组数据的68%，在X±2SD范围内分布的数据占总体的95%，在X±3SD范围内分布的数据占总体的99%。当我们要求检验结果在X±2SD范围内为合格时，将有95%的数据可能合格。

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