小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA试剂盒

让ELISA实验不失败的经验

ELISA检测系统是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在操作过程中总是会出现或大或小的问题，比如说花板、假阳性、全显色、信号值比空白还低等等。下面就由我抛砖引玉地来说一下，做的经验总结：

1、有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，我把方法扼要的列出如下：①亲和素生物素：先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法平均、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。②小分子必需依赖和大的蛋白载体小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA 试剂盒偶联后才能固定在固相载体上。包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以被其识别，所以保留抗原很重要，我做重组蛋白时，师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。③脂类物质：可将其在有机溶剂（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质天然干固在固相表面。

2、应留意以下原理：因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附长短特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。包被液的选择，一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时因为试验的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。详细的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下终极可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。　　小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA 试剂盒

3、但终极选用什么，要依据试验详细来实践。常用封锁剂有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明胶；脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使用（5%－10％）；还有一些稀有用到的各种动物血清（主要为了排除相似蛋白干扰）和酪蛋白等等。封锁就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲，从而排斥ELISA试剂盒后的步骤中干扰物质的再吸附。封锁：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。

4、 在洗板时会有一定误差，人为因素很大（当然有前提的用洗板机除外），洗的不彻底或串了孔，对如斯敏捷的ELISA系统可是不小的影响。由于聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的，清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干扰物质，在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。洗涤板：可以说在ELISA操纵中，洗涤是最主要的枢纽技小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA 试剂盒术。

5、加抗体标本(和二抗)：注意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用pbs稀释，也可用封闭液去稀释。如需加二抗，还要注意二抗的工作浓度，太高浪费，太低则着色浅。

6、显色：显色系统又很多，我们一开始做的时候，要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵，AP结合物可加叠氮钠。

7、每次做尽量要把阴阳空三个对照做好，小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA 试剂盒如出现问题也好分析。

hz-E13053 鸡传染性鼻炎抗体(IC)ELISA试剂盒 Chicken infectious coryza,ic ELISAkit

hz-E13054 鸡透明质酸(HA)ELISA试剂盒 Chicken Hyaluronic acid,HA ELISAkit

hz-E13055 鸡硫酸类肝素(HS)ELISA试剂盒 Chicken heparan sulfate,HS ELISAkit 

hz-E13056 鸡催乳素(PRL)ELISA试剂盒 Chicken prolactin,PRL ELISAkit

hz-E13057 鸡白血病病毒抗原(ALV-AG)ELISA试剂盒 Chicken Avian Leukosis Virus AG,ALV-AG ELISAkit

hz-E13058 鸡促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒 Chicken follicle-stimulating hormone,FSH ELISAkit 

hz-E13059 鸡促黄体激素(LH)ELISA试剂盒 Chicken Luteinizing Hormone,LH ELISAkit

hz-E13060 鸡γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒 Chicken Interferon γ ,IFN-γ ELISAkit 

hz-E13061 鸡白介素6(IL-6)ELISA试剂盒 Chicken Interleukin 6,IL-6 ELISAkit

hz-E13062 鸡碳酸酐酶(CA)ELISA试剂盒 Chicken carbonic anhydrase,CA ELISAkit

hz-E13063 鸡抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒 Chicken Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ ELISAkit 

hz-E13064 鸡热休克蛋白20(HSP-20)ELISA试剂盒 Chicken Heat Shock Protein 20,HSP-20 ELISAkit 

hz-E13065 鸡热休克蛋白60(Hsp-60)ELISA试剂盒 Chicken Heat Shock Protein 60,HSP-60 ELISAkit 

hz-E13066 鸡17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒 Hydroxycorticosteroids,17-OHCS ELISAkit 

hz-E13067 鸡白介素4(IL-4)ELISA试剂盒 Chicken Interleukin 4,IL-4 ELISAkit 

hz-E13068 鸡白介素2(IL-2)ELISA试剂盒 Chicken Interleukin 2,IL-2 ELISAkit

hz-E13069 鸡一氧化氮(NO)ELISA试剂盒 Chicken nitric oxide,NO ELISAkit 

hz-E13070 鸡单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体(HSVⅡ-Ab)ELISA试剂盒 Chicken Herpes simplexvirus Ⅱ antibody,HSVⅡ-Ab ELISAkit 

hz-E13071 鸡补体3裂解产物(C3SP)ELISA试剂盒 Chicken Complement 3 split product,C3SP ELISAkit 

hz-E13072 鸡肾上腺髓质素(ADM)ELISA试剂盒 Chicken adrenomedullin,ADM ELISAkit

hz-E13073 鸡巨噬细胞替代激活相关化学因子1(AmAC-1)ELISA试剂盒 Chicken Alternative macrophage activation-associated CC chemokine 1,AmAC-1 ELISAkit

hz-E13074 鸡免疫核糖核酸(Irna)ELISA试剂盒 Chicken Immune RNA,Irna ELISAkit

hz-E13075 鸡β内酰胺酶(β-lactamase)ELISA试剂盒 Chicken β-lactamase ELISAkit

hz-E13076 鸡流行性乙型脑炎抗体IgG(JE IgG)ELISA试剂盒 Chicken Japanese Encephalitis IgG,JE IgG ELISAkit 

hz-E13077 鸡α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA试剂盒 Chicken α-Glucosidase,a-Glu ELISAkit 

hz-E13078 鸡血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA试剂盒 Chicken Platelet Factor 4,PF-4 ELISAkit