人神经母细胞瘤细胞 SK-N-SH细胞凋亡检测技术与方法详解:
细胞凋亡(Apoptosis),又称细胞程序性死亡(PCD: Programmed Cell Death),是指细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身的程序,自己结束其生命的过程.它是一个主动的,高度有序的,基因控制的,一系列酶参与的过程.细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式,根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区别开来.凋亡的检测方法有很多,下面介绍几种常用的测定方法.
一、细胞凋亡的形态学检测
根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法.
1、光学显微镜和人神经母细胞瘤细胞 SK-N-SH细胞倒置显微镜
(1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体.贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落.
(2) 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等.凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态.
2、荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜
一般以细胞核染色质的人神经母细胞瘤细胞 SK-N-SH细胞形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况.
常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI.三种染料与 DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区.紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光.
Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml.DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色.储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml. 结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;aⅡ期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;bⅡ期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体细。
胞凋亡检测技术与方法图
人神经母细胞瘤细胞株 SH-SY5Y细胞
CEA005Mu 小鼠血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Angiotensin II (AngII)
HZA006Mu 小鼠双调蛋白(AREG)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Amphiregulin (AREG)
HZA001Mu 小鼠激活素A(ACVA)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Activin A (ACVA)
HZA011Mu 小鼠脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF)
HZA013Mu 小鼠骨成型蛋白2(BMP2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)
HZA014Mu 小鼠骨成型蛋白4(BMP4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4)
HZA015Mu 小鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR1A)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein Receptor 1A (BMPR1A)
HZA017Mu 小鼠上皮性钙黏附蛋白(CDHE)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE)
HZA022Mu 小鼠血管内皮细胞蛋白C受体(PROCR)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Protein C Receptor, Endothelial (PROCR)
HZA025Mu 小鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF)
HZA026Mu 小鼠趋化因子C-C-基元配体3样蛋白1(CCL3L1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Chemokine C-C-Motif Ligand 3 Like Protein 1 (CCL3L1)
HZA028Mu 小鼠红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Erythropoietin (EPO)
HZA029Mu 小鼠E选择素(SELE)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Selectin, Endothelium (SELE)
HZA030Mu 小鼠凋亡相关因子(FAS)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Factor Related Apoptosis (FAS)
HZA031Mu 小鼠凋亡相关因子配体(FASL)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Factor Related Apoptosis Ligand (FASL)
HZA037Mu 小鼠纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Fibronectin (FN)
HZA038Mu 小鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)ELISA试剂盒 ELISA Kit for FMS Like Tyrosine Kinase 3 Ligand (Flt3L)
HZA040Mu 小鼠趋化因子C-X3-C-基元配体1(CX3CL1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1)
HZA042Mu 小鼠粒细胞集落刺激因子(GCSF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Colony Stimulating Factor 3, Granulocyte (GCSF)
HZA045Mu 小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Colony Stimulating Factor 2, Granulocyte Macrophage (GMCSF)
HZA046Mu 小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Glucoprotein 130 (gp130)
HZA548Mu 小鼠细胞间粘附分子1(ICAM1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Intercellular Adhesion Molecule 1 (ICAM1)
CEA592Mu 小鼠生长抑素(SST)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Somatostatin (SST)
CEA876Mu 小鼠降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Calcitonin Gene Related Peptide (CGRP)
HZA875Mu 小鼠碳酸酐酶Ⅰ(CA1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Carbonic Anhydrase I (CA1)
HZA469Mu 小鼠内皮脂肪酶(LIPG)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Lipase, Endothelial (LIPG)
HZA800Mu 小鼠妊娠关联血浆蛋白A(PAPPA)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Pregnancy Associated Plasma Protein A (PAPPA)
HZA399Mu 小鼠高迁移率族蛋白1(HMG1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for High Mobility Group Protein 1 (HMG1)
HZA396Mu 小鼠性激素结合球蛋白(SHBG)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Sex Hormone Binding Globulin (SHBG)
HZA395Mu 小鼠抑制素A(INHA)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Inhibin A (INHA)
HZA355Mu 小鼠甲状腺球蛋白(TG)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Thyroglobulin (TG)
CEA380Mu 小鼠血管活性肠肽(VIP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Vasoactive Intestinal Peptide (VIP)
HZA902Mu 小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶(ACP5)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Acid Phosphatase 5, Tartrate Resistant (ACP5)
CEA310Mu 小鼠载脂蛋白H(APOH)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Apolipoprotein H (APOH)
HZA722Mu 小鼠基质细胞衍生因子4(SDF4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Stromal Cell Derived Factor 4 (SDF4)