关注
已关注
已认证
粉丝量 0
400-860-5168转3328
仪器信息网认证电话，请放心拨打
核酸检测中PCR污染原因和处理方法
2024/09/09 14:25
阅读：4
分享：
方案摘要：
产品配置单：
MDCK犬肾细胞
型号： 1支
产地：
品牌： 远慕
¥1280
参考报价
细胞壁不溶性酸性转化酶（B-AI）测试盒 微量法
型号： 100管/48样
产地：
品牌： 远慕
¥1100
参考报价
方案详情：
（1）样品间的交叉污染：样品污染主要是由于样品在运输、储存、放置过程中处置不当造成的污染。样品核酸模板在提取过程中，由于操作不当也会导致样品间的污染。
（2）试剂的污染：由于操作不当，造成核酸提取、扩增过程中各相关试剂的污染。
（3）PCR扩增产物污染：这是PCR反应中最主要最常见的污染。极微量的PCR产物污染就可造成假阳性。最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染。操作时比较剧烈地摇动反应管、开盖、反复吹吸样液都可形成气溶胶而引起污染。
（4）克隆质粒的污染：在用克隆质粒作阳性对照时，有时会出现克隆质粒的污染。
（5）实验器具的污染：如移液器的污染等。
污染原因：
（1）试剂污染：检测阴阳性对照反应结果。如果阴性对照反应结果为阳性，说明PCR反应体系中某一种或数种试剂被污染。若阳性对照反应为阴性，则说明PCR反应体系中存在抑制物质，或一种至数种PCR反应试剂失效。
（2）环境污染：在排除试剂污染的可能性之后，如果污染情况仍存在，则考虑可能为环境污染。常见的污染源可能为各种实验表面的污染，包括实验台面、仪器设备表面、各种开关或把手等：对于这些污染可用擦拭实验来查找可疑污染源。其步骤如下：
a.用无菌水浸泡过的无菌棉签擦拭可疑污染源；
b.0.1mL去离子水浸泡；
c.取5μL做PCR实验；
d.电泳检测结果。
如果经过上述追踪实验，仍不能查找到确切污染源，则污染可能是由空气中PCR产物的气溶胶造成的。
污染处理：
（1）环境污染：
a.稀酸处理法：对可以器具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡，使残余DNA脱嘌呤。
b.紫外照射（UV）法：紫外波长（nm）一般选择254nm和300nm，照射30min即可。选择UV作为消除残留PCR产物污染时，要考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的分布，UV照射仅对500bp以上长片段有效，对短片段效果不大。
c.若可能是气溶胶污染，应该更换实验场所，若条件不允许，则重新设计新的引物（与原引物无相关性）。
（2）试剂污染：
若经对照实验显示，为试剂造成的污染，应立即更换试剂。
下载本篇解决方案：
DNA/RNA降解原因+预防措施
核酸降解是DNA/RNA分子中的碱基和戊糖间的氮糖苷键，或磷酸二酯键在物理因素、化学因素和生物因素等作用下发生水解，使DNA/RNA链发生断裂。
生物相关产业
2024/09/04
bradford法测蛋白浓度误差原因分析
Bradford蛋白质测定法是根据蛋白质与染料结合的原理设计的。考马斯亮蓝染料（G-250）在酸性溶液中与蛋白质的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基结合，使得染料的最大光吸收峰位置由原来的465nm变为595nm，溶液颜色也由原来的棕红色变为蓝色，反应迅速且稳定，形成的化合物颜色深浅在一定范围内与蛋白质浓度成正比关系，因此可通过测定结合染色后溶液在595nm处的光吸收度值来计算溶液中蛋白质的含量。
生物相关产业
2024/08/26
