人神经趋化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒操作步骤

产品名称：人神经趋化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒
英文名称：Human fractalkine/neurotactin ELISA Kit
产品规格：48T/96T

人神经趋化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒组成:
试剂盒组成    96孔配置    48孔配置    备注
微孔酶标板    8孔×12条    8孔×6条    无
标准品    0.3mL×6管    0.3mL×6管    无
样本稀释液    6mL    3mL    无
检测抗体-HRP    10mL    5mL    无
20×洗涤缓冲液    25mL    15mL    按说明书进行稀释
底物A    6mL     3mL    无
底物B    6mL     3mL    无
终止液    6mL     3mL    无
封板膜    2张    2张    无
说明书    1份    1份    无
自封袋    1个    1个    无
 
备注：
1. 标准品浓度依次为：48、24、12、6、3、0 mg/L
2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
 
样本处理及要求
1、血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2、血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3、细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
 
实验需要而未提供的试剂和器材：
1、酶标仪（450nm）
2、高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3、37℃恒温箱
4、蒸馏水或去离子水
 
试剂准备：
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
 
人神经趋化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒操作步骤：
1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3、样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
 
注意事项
1、严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2、洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3、消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4、底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5、避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6、在储存和温育时避免强光直接照射。
7、平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8、任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9、不能使用过期产品。
10、如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
 
实验结果计算:
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。