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荚膜染色法
2019/04/04 17:13
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方案摘要：
产品配置单：
硫酸铬溶液15244-38-9
型号： 克
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品牌： 远慕
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变性溶液
型号： 克
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型号： 克
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方案详情：
一、实验目的和要求
(1)学习并掌握荚膜染色法。
(2)学习芰膜染色法的原理。
二、基本原理
荚膜是包围在细菌细胞外的一层黏液状或胶状物质，其成分为多糖、糖朊或多肽。由于荚摸与染料的亲和力弱、不易着色，而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去，所以通常用衬托染色法染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。荚膜含水量高，制片时通常不用热固定，以免变形影响观察。下面介绍四种荚膜染色法，其中湿墨水法较简便，并适用于各种有荚膜的细菌。
三、实验材料与设备
1．菌种
褐球固氮菌或胶质芽孢杆菌约2d无氮培养基琼脂斜面培养物。
2．染色剂
1％甲基紫水溶液、1％结晶紫水溶液、6％葡萄糖水溶液、20％硫酸铜水溶液、甲醇、黑色素。
黑色素是一个通用名，代表一大类在大多数有机体中存在的天然色素，一般认为是酪氨酸在黑色素细胞中经过一系列氧化和聚合生成的。黑色素的配制方法为：将黑色素(5g)在蒸馏水(100mL)中煮沸5min，然后加入40％甲醛0．5mL，作防腐剂。试剂应至少满足但不限于如下标准：GB／T 683—2006《化学试剂 甲醇》、HG／T 4581—2013《化学试剂高效液相色谱淋洗液甲醇》。
3．仪器或其他用具
载玻片、盖玻片、滤纸、显微镜等。
四、操作步骤
1．湿墨水法
1)制备茵和黑色素混合液
加一滴黑色素于洁净的载玻片上，然后挑取少量菌体与其混合均匀。也有用墨水和黑色素替换的。墨水和黑色素都属于混合物，可以溶液替换。
2)加盖玻片
将一洁净盖玻片盖在混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压以吸去多余的混合液。加盖玻片时勿留气泡，以免影响观察。
3)镜检
用低倍镜和高倍镜观察，用相差显微镜观察效果更好。背景灰色，菌体较暗，菌体周围明亮的透明圈即为荚膜。
2．干墨水法
1)制混合液
加一滴6％葡萄糖液水溶液于洁净载玻片的一端，然后挑取少量菌体与其混合，再加一杯黑色素，充分混匀。玻片必须洁净无油迹，否则，涂片时混合液不能均匀散开。
2)制推片
另取一段边缘光滑的载玻片作推片，将推片一端的边缘置于混合液前方，然后稍向后拉。当推片与混合液接触后，轻轻左右移动，使之沿推片接触的后缘散开，之后以大约30。角迅速将混合液推向另一端，使混合液铺成薄层(图2—14)。
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