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RNA提取
2019/02/25 15:32
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方案摘要：
产品配置单：
DEPC水7732-18-5
型号： 克
产地：
品牌： 远慕
面议
参考报价
DEPC-PBS溶液(活跃)
型号： 100ml
产地：
品牌： 远慕
¥1
参考报价
DEPC处理水(0.1%)
型号： 500ml
产地：
品牌： 远慕
¥1
参考报价
方案详情：
一、目的
掌握RNA提取的基本技术，了解RNA提取过程中的各种注意事项。
二、原理
RNA提取是分子生物学实验中难度较大的实验技术。
RNA提取和DNA提取有类似的地方，因为它们都是核酸，都具有较好的水溶性。提取RNA首先破碎细胞，然后用提取液将RNA溶出，反复抽提去除蛋白质，加入乙醇沉淀RNA，将RNA沉淀溶解备用。那么如何区分DNA和RNA分开？DNA和RNA的溶解性不同，DNA在1M的盐溶液中具有最HAO的溶解度，而RNA在0.14M的盐溶液中具有最HAO的溶解度，所以可以利用它们的溶解性将它们进行区分。另外，RNA的分子量一般比较小，而DNA分子很大且和蛋白结合成复合体，所以DNA更容易随蛋白沉淀，而RNA具有较好的溶解性。
RNA提取的另一个关键问题就是如何抑制或去除环境中RNA酶。所有的玻璃、陶瓷和铁器具在180℃×6 h以上。所有的塑料器皿用0.1％的DEPC水37℃过夜浸泡，然后湿热灭菌80℃烘干备用。配制溶液所需的水也要用DEPC处理过的水，而配置Tris相关的缓冲液时Tris会与DEPC发生反应，应避免用DEPC处理。另外操作过程中应戴手套。
判断RNA 的质量主要有两个标准，一是纯度，二是完整性（是否被降解）。RNA的纯度可以通过分光光度计进行测定的A260／A280值来判断。RNA的完整性主要通过电泳分析来阐明，未降解的总RNA电泳时在凝胶中会出现18S和28SrRNA对应的条带（如果有DNA污染则在RNA后会发现基因组DNA对应的条带）。RNA电泳系统也要严格对RNA酶进行处理。如果用普通琼脂糖凝胶电泳，则用尽量减少电泳时间。
三、试剂与器材
（一）试剂
1、暗培养7天的小麦苗，用前光照诱导3 h
2、DEPC
3、DEPC处理的ddH2O
4、RNA提取液：（每1000毫升中含有）
Tris 6.06 克 (最终浓度为50 mM )
LiCl 6.03 克 (LiCl -H2O9.06克) (最终浓度为150 mM )
EDTA（0.5 M） 10 毫升 (最终浓度为5 mM )
下载本篇解决方案：
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