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单细胞悬液的制备方法
2019/02/19 10:16
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方案摘要：
产品配置单：
人细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)酶联免疫分析ELISA说明书
型号： 96T/48T
产地：
品牌： 远慕
¥1
参考报价
方案详情：
动物细胞的培养、流式细胞术对细胞的各种参数分析等实验必须基于单细胞的基础上，根据不同实体组织成分的特点可选择不同的分散细胞的方法，以期达到单细胞产量高、细胞损伤小的目的。在实体组织分散为单细胞的过程中，解离的方法有可能瞬间或持久地影响细胞的性质，比如，形态上显而易见的细胞膜破损，细胞表面上可出现泡状特征，还有一些是难以观察到的线粒体活性的变化、选择性膜表面抗原的丢失、蛋白质的丢失等，细胞受损程度受温度、pH值、处理时间等多种因素的影响。
机械性或人工制备的单细胞，在某些性质上很可能已改变了原组织细胞特性，因此处理不同组织时，努力摸索方法，尽可能采用对细胞损伤小，产率较高的单细胞悬液制备方法，最da限度地保持细胞原有特性。下面介绍几种细胞悬液制备方法，仅供参考。
（一）酶消化法
酶的作用原理主要有三方面：一是破坏组织间的胶原纤维、弹性纤维等，二是水解组织细胞的紧密连接结构的蛋白质，三是水解组织粘多糖物质。
酶消化法是实体组织分散为单细胞的主要方法之一。常用的酶类有：胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、溶菌酶、弹性蛋白酶等。可根据分散的组织类型确定使用的酶类。需要注意的是使用条件和影响因素（酶浓度、酶效价、作用时间、pH值）等，如胃蛋白酶在碱性环境下失去活性，胰酶在中性溶液中活性欠佳。
酶消化法常规程序如下：1、将适合于酶消化的组织置于离心管
中。
2、将选好的酶溶液1～2ml加入盛有被消化组织的试管中。
3、常规消化20～30min（恒温37℃或室温），消化期间间断振荡
或吹打。
4、终止消化，收集细胞悬液，以300目尼龙网过滤，除去细胞，
以低速离心除去细胞碎片。
5、加入PBS 2ml充分混匀，离心弃掉上清。再加入0.5ml PBS重
悬细胞。
6、将制备好的单细胞悬液进行荧光标记后上机检测或保存备用。
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