DAPI染色液可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用,可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光,和EB相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞,荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) ,且对活细胞无毒副作用。DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟,在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。
DAPI染色液注意事项:
荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。
为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。抗荧光淬灭封片液(货号:AR1109)。
DAPI对人体有一定刺激性,请注意适当防护。
为了您的安全和健康,使用时戴一次性手套操作。
DAPI染色液步骤:
1. 对于固定后的细胞或组织样品,适当洗涤去除固定剂。如果需要进行免疫荧光染色,可先进行免疫荧光染色,染完毕后再进行DAPI染色。如果不需要进行其它染色,则直接进行DAPI染色。
2. 对于贴壁细胞或组织切片,加入少量DAPI染色液,覆盖住样品即可。对于悬浮细胞,至少加入待染色样品体积3倍的色液,混匀。
3. 室温孵育5-10分钟。
4. 吸除DAPI染色液,用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次,每次3-5分钟,洗掉未结合的DAPI。
5. 用带有360nm激发波长,460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。
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