ELISA试剂盒技术对抗体的4个重点问题解答

    Abcam品牌抗体ELISA试剂盒是我司主营且热销的产品系列之一，昨日下午，我公司ELISA技术对抗体的4个重点问题做出了分析解答，供您参考。

问题一：当选择一个肽用于免疫原，什么是重要的？

    答：通常蛋白的C端或N端是蛋白质中暴露机会最高的部分。另外，为了模仿蛋白的行为，合成的肽应该有类似于蛋白质“cut out off”后的结构和电荷。因此：

    1. 来源于C端的多肽那么N端应用乙酰化修饰；

    2. 来源于N端的多肽那么C端应用酰胺化修饰；

    3. 来源于内部序列的多肽则需要肽的两端都修饰。

问题二：什么样的抗原(s)可以用于注射？

    答：天然蛋白，重组蛋白，多肽碳水化合物或其他微生物、细菌、病毒提取物可用于免疫接种，需要大小为5-10 kDa的小分子诱导充分的免疫反应，有生物毒害的材料禁止用于免疫接种。上海恒远提示：

    1. 如果抗体作用于变性的靶标蛋白，变性的抗原是首选。

    2. 如果使用的抗体的目标蛋白质是天然蛋白，非变性的抗原是首选。

    3. 并不是所有anti-peptide抗体都能识别天然蛋白质，因此谨慎选择肽序列是至关重要的。

    4. 通过重组蛋白在细菌表达体系诱导所制备的抗体在某些情况下无法识别天然蛋白质。原因可能是在细菌细胞中表达的蛋白质抗原发生错误的折叠。不能保证用于任何的免疫反应中都能得到很好的成功。

问题三：用于免疫接种的抗原需要多少量？

    答：这取决于抗原的免疫原性。在标准试验方案中，我们使用：大约500μg肽/动物/15周龄，约400μg蛋白质/动物/15周龄。

    如果所选动物抗原和抗体之间的关联性较低，免疫接种时较少量的抗原(少于10μg)也是可以接受的。我们还可以使用自己的免疫方案。上海恒远提醒注意：如果蛋白质需要浓缩，在某些情况下，在浓缩设备中蛋白会部分附着在膜上从而部分蛋白质损失。

问题四：为什么抗原诱导反应只会产生一些IgM抗体？

    答：由于缺乏T细胞刺激，高度保守的哺乳动物蛋白质的响应往往很薄弱，主要导致IgM抗体的产生，不过，也有例外。如果是保守的哺乳动物抗原，则使用亲源关系远的物种。

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