蜂蜜中链霉素和双氢链霉素的测定

一、样品提取  

准确称取5 g试样于50 mL离心管中，加入10 mL 提取液（含2 %三氯乙酸的磷酸盐缓冲溶液），涡旋混匀1 min，超声提取10 min，再加入10 mL提取液并定容至25 mL，涡旋混匀1 min后超声提取5 min，在10000 r/min离心5 min，待净化。

二、 样品净化（Copure^® HLB,60 mg/3mL ）

活化：依次用3 mL甲醇，3 mL水活化Copure^® HLB固相萃取小柱；

上样：取5 mL待净化液至已活化好的固相萃取小柱；

淋洗：用2mL水淋洗固相萃取小柱两次，抽干小柱；

洗脱：用1 mL 甲酸-乙腈-水（2:10:88，v:v:v）溶液洗脱，收集洗脱液，用2 %氨化乙腈1 mL定容至2 mL，涡漩，过滤膜，上机测试。

三、标曲配制

选同类型空白样品，依次加入适量混合标准中间溶液，按照样品提取和净化的步骤进行操作，配制成上机浓度分别为2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL的标准曲线。

四、仪器条件（Thermo Fisher TSQ Endura）

液相部分：

色谱柱： Hilic (2.1 mm×100 mm,2.7 μm)

流动相：A：5 mmol/L乙酸铵溶液（含0.3 %甲酸）  B：乙腈（含0.3 %甲酸）

流速：0.3 mL/min   柱温：35℃   进样量：10 μL

洗脱程序：梯度洗脱表1

表1 梯度洗脱程序

质谱条件：

离子源：HESI           电喷雾电压：3500 V            鞘气压力：40 arb  

辅气压力：10 arb         离子传输管：350 ℃           辅气温度：375 ℃

表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（*为定量离子）

五、实验结果

5.1测试数据

表3 加标回收率结果

5.2测试色谱图

图1蜂蜜加标样品总离子流图（20.0 μg/kg）

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