动物源性食品中β-受体激动剂检测的固相萃取方法（CopureTM MCX）

动物源性食品中β-受体激动剂检测的固相萃取方法（Copure MCX）

一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为猪肉样品的前处理方法，LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化猪肉样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物
五种β-受体激动剂物质：克仑特罗(CAS:37148-27-9)，沙丁胺醇(CAS:18559-94-9)，莱克多巴胺(CAS:97825-25-7)，特布他林(CAS:23031-25-6)，妥布特罗(CAS:41570-61-0)。

三、应用范围
本方法适用于动物源性食品中β-受体激动剂LC-MS/MS检测及确证。

四、参考标准
《GB/T 21313-2007 动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法》。

五、实验材料
Biocomma Copure MCX固相萃取柱200mg/6mL(Cat.No.COMCX6200)。

六、实验方法
1、样品提取
称取均质猪肉试样10.0ｇ试样(精确至0.01 g)，加入15 mL pH 5.2的乙酸-乙酸铵缓冲溶液，1000 r/min 匀浆1min，再加入β-葡萄糖醛酸苷肽酶/芳香磺酸酯酶溶液100 μL，于37 ℃±1 ℃振荡酶解过夜。取出冷却后，10 ℃9500 r/min离心10 min。取全部上清液。待净化。
2、SPE柱净化
(1) 活化：加入6 mL甲醇、6 mL水、6 mL 0.1 mmol/L高氯酸(pH 4.0)溶液活化。
(2) 上样和洗脱：当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，过柱，弃去滤液，用2 mL甲醇、2 mL 2%甲醇水溶液淋洗，最后用7 mL5%氨化甲醇洗脱。
(3) 重新溶解：洗脱液缓慢氮气流条件下吹至近干，用甲醇-0.1%甲酸水溶液溶解定容至1.0 mL，涡旋混匀1 min，用于LC-MS/MS测定。
3、LC-MS/MS条件
色谱柱：Venusil ASB C18（2.1×150mm，5 μm）；
质谱仪：API 4000
流动相：A:0.1%甲酸水溶液 B:甲醇溶液；
洗脱方式：梯度洗脱
表1 流动相梯度洗脱程序

流速：0.2 mL/min
柱温：40 ℃
进样体积：2 μL
质谱仪：API 4000
离子源：电喷雾(ESI)
扫描模式：正离子
检测方式：多反应监测(MRM)
表2 质谱仪离子源参数

表3 ?-受体激动剂的母离子和子离子参数表

七、实验结果
1、0.5μg/kg猪肉基质加标回收结果：
表4 0.5μg/kg猪肉基质加标回收结果

2、添加水平为0.5μg/kg猪肉基质中β-受体激动剂检测色谱图
图1 ?-受体激动剂待测物总离子流图

图2 沙丁胺醇(sabutamal)(240.1/147.8)色谱图