羟基磷灰石Ca10(PO4)6(OH)2被加工成高纯度球状颗粒,可作为层析填料使用。由于其结晶的化学结构、立体构造的特点,羟基磷灰石与抗体的Fab片段、Fc片段可发生相互作用。所以至今为止,羟基磷灰石在抗体及蛋白质的纯化、多聚体和残留核酸的去除等工艺中,作为精细纯化步骤的填料被广泛使用。最近,由于其特殊的相互作用(金属螯合、氢键等作用),羟基磷灰石作为阳离子交换型的混合模式填料,被人们重新认识。
羟基磷灰石由于在酸性溶液中化学稳定性相对较差,所以使用条件上存在一定的限制。
● 羟基磷灰石的主要用途
· 分离抗体及蛋白质的多聚体、异构体、分解物以及电荷异质体等目标产品内源性杂质
· 分离DNA、HCP、病毒等来自生产工艺、混入的外源性杂质/污染物
· 适用于最终(精纯)步骤中的分离纯化
● 在酸性条件下,与市售羟基磷灰石耐久性对比
在高吸附(高载量;下同)型羟基磷灰石Ca++Pure-HA、市售高吸附型(B公司、Type I)和高耐久型(B公司、Type II;载量较低)羟基磷灰石填料装填的层析柱中,连续用弱酸性蒸馏水通液时,层析柱的理论塔板数的变化如上图所示。市售品在大约80~90小时通液后,理论塔板数下降10%以上。与之相比,Ca++Pure-HA的理论塔板数虽然也会缓慢减少,但在约160小时之前,理论塔板数仍保持在90%以上。也就是说,Ca++Pure-HA属于高吸附型,且在酸性条件下的耐久性更好。另外,在更低的酸性条件(pH 6.5~3.5)下使用和需要酸洗时,可以推荐使用耐盐性阳离子交换填料TOYOPEARL Sulfate-650F和阳离子交换型的混合模式填料TOYOPEARL MX-Trp-650M。
● 羟基磷灰石和混合模式填料(包括耐盐性离子交换填料)的性能比较
分离模式 | TOYOPEARL | 羟基磷灰石 | ||
耐盐性阴离子交换填料 | 耐盐性阳离子交换填料 | 混合模式 | ||
产品名称 | NH2-750F | Sulfate-650F | MX-Trp-650M | Ca++Pure-HA |
填料基质 | 亲水性聚合物 | 羟基磷灰石 | ||
粒径 | 45 μm | 45 μm | 75 μm | 39 μm |
官能团、配基 | 多胺基 | 硫酸基 | 色氨酸 | Ca2+, PO43-, OH- |
官能团、配基密度 | 0.07~0.13 eq/L | ≥0.53 eq/L | - | - |
静态吸附载量 (SBC:人IgG) | ≥70 g/L | ≥114 g/L | ≥75 g/L | ≥20 g/L* (55 g/L) |
出厂溶剂 | 20%乙醇** | 20%乙醇、 0.2 mol/L醋酸钠 | 20%乙醇 | 干燥凝胶 (或1 mol/L的NaOH溶液) |
保存温度 | 室温 | |||
特点 | · 即使在盐浓度较高条件下,也具有较高载量 · 有较大的细孔径,去除 · 流穿效果好 | · 多聚体分离效果更好 · 即使在盐浓度较高条件下,也具有较高载量 · 也可用于肝素类亲和分离 | · 高吸附载量,分离峰形 · 即使在盐浓度较高条 · 二价特异性抗体、 | · 具有与市售品同等或更高的吸附载量 · 填料耐久性也更高 · 具有与市售品同等或更高的性能,但价格更便宜 (注意) 洗脱液使用磷酸钙、氯化钾 |
* 动态吸附量(DBC):驻留时间是2分钟;驻留时间5分钟时,DBC是55 g/L-gel。
** TOYOPEARL NH2-750F需要使用0.1 mol/L HCl清洗,置换对离子后,才能保存在20%乙醇水溶液中。
● 羟基磷灰石和混合模式填料(包括耐盐性离子交换填料)的产品一览表
货号 | 产品名称 | 粒径 (μm) | 包装规格* | 备注 |
0045045 | Ca++Pure-HA | 39 | 50 g | 散装填料(瓶) |
0045053 | Robocolumn Ca++Pure-HA, 8 × 200 μL | 39 | 200 μL × 8 | 96微孔板专用 |
0045054 | Robocolumn Ca++Pure-HA, 8 × 600 μL | 39 | 600 μL × 8 | 96微孔板专用 |
0023439 | TOYOPEARL NH2-750F | 45 | 250 mL | 散装填料(瓶) |
0023443 | ToyoScreen NH2-750F | 45 | 1 mL × 6 | 预装柱,需要使用ToyoScreen Holder(柱套) |
0023444 | ToyoScreen NH2-750F | 45 | 5 mL × 6 | 预装柱,需要使用ToyoScreen Holder(柱套) |
0045021 | RoboColumn NH2-750F | 45 | 200 μL × 8 | 96微孔板专用 |
0045022 | RoboColumn NH2-750F | 45 | 600 μL × 8 | 96微孔板专用 |
0023468 | TOYOPEARL Sulfate-650F | 45 | 250 mL | 散装填料(瓶) |
0023472 | ToyoScreen Sulfate-650F | 45 | 1 mL × 6 | 预装柱,需要使用ToyoScreen Holder(柱套) |
0023473 | ToyoScreen Sulfate-650F | 45 | 5 mL × 6 | 预装柱,需要使用ToyoScreen Holder(柱套) |
0045027 | RoboColumn Sulfate-650F | 45 | 200 μL × 8 | 96微孔板专用 |
0045028 | RoboColumn Sulfate-650F | 45 | 600 μL × 8 | 96微孔板专用 |
0022817 | TOYOPEARL MX-Trp-650M | 75 | 25 mL | 散装填料(瓶) |
0022824 | ToyoScreen MX-Trp-650M | 75 | 1 mL × 6 | 预装柱,需要使用ToyoScreen Holder(柱套) |
0022825 | ToyoScreen MX-Trp-650M | 75 | 5 mL × 6 | 预装柱,需要使用ToyoScreen Holder(柱套) |
0045051 | RoboColumn MX-Trp-650M | 75 | 200 μL × 8 | 96微孔板专用 |
0045052 | RoboColumn MX-Trp-650M | 75 | 600 μL × 8 | 96微孔板专用 |
0021400 | ToyoScreen Holder | - | - | 柱套、转接头(入口1 mL专用)、(入口5 mL专用)、转接头(出口)各1个、堵头2个 |
* Ca++Pure-HA是干燥粉末品。可提供不同体积包装的产品。 ToyoScreen预装柱可以直接连接HPLC系统。
Ca++Pure-HA是美国制造的产品,受美国相关出口法令的限制。
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