Life Technologies细胞内吞和吞噬产品

Life Technologies提供了用于细胞功能和健康检测的各种试剂。其中许多分析以荧光或比色法为基础，具有灵敏性、便利性和安全性。这些产品已经过多种仪器平台验证，包括显微镜、流式细胞仪、酶标仪和高内涵筛选，能够实现各种细胞功能的分析：

本文为大家介绍内吞和吞噬的产品

pHrodo?染料是可用于分子通路和微生物研究(对细胞健康或致病性是否重要)的荧光工具——可穿过质膜进入细胞后最终定位。 Life Technologies专利pH 敏感的pHrodo?染料是可用作内吞和吞噬过程的特异性指示剂。

该染料在中性 pH 下无荧光，而在酸性环境下呈亮红色。这种在低pH下荧光信号增强的特点，使其非常适用于内吞吞噬过程及药物和/或环境因素调控研究。而且染料在中性pH值下拥有几乎不发荧光的特点也省去了洗涤步骤和染料淬灭的担忧，又因为任何非内化的染料基本不发荧光——这使得pHrodo?吞噬指示剂非常适合用于体内研究。对于多重分析应用，pHrodo?染料有红色和绿色可供选择，经过甲醛固定剂处理后其信号可保留。pHrodo?染料还可用于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和酵母多糖A BioParticles?吞噬作用的便捷结合物及用于葡聚糖BioParticles?内吞作用的结合物。如果您想要制备自己的结合物，多种反应试剂和抗体标记试剂盒中均提供 pHrodo? green和 pHrodo? red。您可以利用pHrodo?染料：

图1 基于pHrodo?染料检测吞噬和内吞过程示意图。pHrodo?染料标记的颗粒(微生物或其他生物分子)加入至细胞中。留在溶液或非特异性粘附在细胞上的这些颗粒由于处于胞外中性环境中而不会发出荧光。通过吞噬和内吞被摄取的颗粒进入囊泡中，pH的下降使pHrodo?标记的颗粒发出明亮的荧光。

图2 使用pHrodo? Green Zymosan Bioparticles?检测MMM细胞的吞噬。MMM巨噬细胞接种于完全培养基中过夜，次日经Live Cell Imaging Solution (A14291DJ)洗涤后加入pHrodo? Green Zymosan Bioparticles? (P35365)，在37℃孵育90min。Hoechst 33342 (R37605)用于染色细胞核。结果表明当这些颗粒被细胞吞噬后才会发出明亮的绿色荧光信号。

注：FCM: FCM: flow cytometry HCS: High Content Screening IF: Immunofluorescence

图3 使用pHrodo? Red Dextran, 10,000 MW检测A431细胞的胞吞。A431巨噬细胞接种于完全培养基中过夜，次日经Live Cell Imaging Solution (A14291DJ)洗涤后加入pHrodo? Red Dextran, 10,000 MW (P10361)，在37℃孵育30min。Hoechst 33342 (R37605)用于染色细胞核。

注：FCM: FCM: flow cytometry HCS: High Content Screening IF: Immunofluorescence

图4 pHrodo?染料应用于流式细胞术。以pHrodo? Red (P36600)标记E. coli后加入到两管外周血中，一管置于37℃水浴槽中，另一管则置于冰浴中作为阴性对照。样本经红细胞裂解后离心，在流式细胞仪上检测。(A)以前向散射及侧向散射圈选粒细胞。(B)置于37℃的样本中，经吞噬的pHrodo? Red (P36600)标记E. coli(红色)的荧光强度增加，而置于冰浴以抑制吞噬作用的阴性对照组(蓝色)则无此情形。

注：FCM: FCM: flow cytometry HCS: High Content Screening IF: Immunofluorescence