AIS 实战课堂 | 从分析放大到制备的方法策略

Advion Interchim Scientific

2022/08/15 08:55

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AIS 实战课堂 | 从分析放大到制备的方法策略

之前的 AIS 小课堂中，我们已经学习了分析型液相色谱和制备型液相色谱的异同，应广大小伙伴的要求，本期我们就“分析方法到制备方法的放大策略”开始今天的学习之旅！

友情链接：AIS 小课堂 | 如何区分分析型液相色谱和制备型液相色谱？

分析柱主要用来判断样品中的组分及含量，而制备柱主要考虑目标物质的纯度、回收率，上样量以及馏分的收集。在实际应用中，通过现有分析方法的直接放大到制备方法，是最节省时间和成本的一种策略。

基本策略

分析方法-制备方法

首先进行方法摸索，了解目标化合物的保留性能，选择合适的流动相梯度、色谱柱填料及规格，进行初步上样研究。借助已定义的数学公式修改流速、上样量和系统硬件参数，从而有效的将分离方法转移至更高容量的色谱柱。

放大策略

分析柱到制备柱的放大要考虑的因素包括色谱柱的尺寸、流量、填料、操作压力、上样量、分离度、产品纯度、产品回收率等内容。在这个过程中，必须保证放大计算的准确性，否则可能无法达到小规模分离的分离度。为了提高方法放大的成功率，同时维持保留时间和选择性不变，需要考虑：

1、小规模和大规模分离必须使用相同的流动相。

2、使用填料、柱长和粒径相同的色谱柱非常容易进行方法放大（或者在保持初始方法的柱长-粒径比率(L/dp)不变的前提下改变粒径）。

3、应使用相同的稀释溶剂制备浓度相同的样品。

流速放大：

放大流速时必须考虑系统的硬件能力，例如最大泵流量和背压限制。如果硬件无法满足流速要求，应考虑更换合适的仪器以满足放大要求。

上样浓度放大：

在方法放大之前，应通过上样量研究来确定特定目标化合物的理想上样量。具体方法：制备高浓度样品，然后逐步增大进样体积；或者制备多个浓度的样品，进样体积保持恒定。这两种方法的目标都是在保持目标化合物与邻近杂质之间具有足够分离度的前提下，确定可进样的最大样品浓度或进样体积。确定色谱柱容量后，可利用公式将其放大，以便用于内径更大的色谱柱和大规模工作流程。

进样体积放大：