薄层色谱-质谱-Flash联用，实现快速鉴定、智能纯化

质谱: expression® CMS

薄层色谱质谱接口：Plate Express® TLC

直接进样分析探头：Atmospheric Solids Analysis Probe® (ASAP)

制备色谱: Interchim puriFlash® XS520 plus

在本应用指南中，我们演示了Advion和Interchim技术的结合是如何加快化合物的合成、纯化和鉴定的。应用中配备了Advion expression® CMS小型台式质谱仪，Plate Express TLC薄层色谱质谱接口，ASAP直接进样分析探头，以及Interchim puriFlash®XS520plus纯化系统。

介绍

化合物的合成，纯化和鉴定过程通常会面临很多挑战。从确保产品的成功合成，到建立快速纯化方法，最后确定馏分的ID，冗长的工作流程既耗时又重复。

本应用指南演示了一个新的工作流程，该流程实现了从合成、纯化到鉴定的无缝衔接，可快速、轻松地推动从反应监测到纯化和馏分ID确认的过程。包括以下三个主要步骤：

•步骤1:使用Plate Express TLC薄层色谱质谱接口和expression® CMS质谱仪监测Suzuki反应，然后进行TLC/CMS分析。

•步骤2:TLC到Flash，通过自动从手机TLC板图像开发的方法，使用puriFlash XS520®系统纯化化合物。

•步骤3:通过expression® CMS小型台式质谱仪和ASAP直接进样分析探头，30s内鉴定馏分ID。

expression® CMS小型台式质谱仪；TLC薄层色谱质谱接口；puriFlash纯化制备仪

方法

步骤1:用薄层色谱监测反应

溴代苯胺和苯硼酸在乙醇中用钯催化剂（图1）在室温下反应2小时。2小时后，取样品在TLC板上点样，在二氯甲烷和环己烷溶剂中展开。

图1:样品混合物包括分子量、结构和反应量

      通过TLC / CMS监测反应：Plate Express TLC 薄层色谱质谱接口与expression® CMS紧凑型质谱仪联用，进行质谱分析（图2）。该系统通过直接从TLC板中获取质谱信息来明确识别斑点（图3）。

      图2：将展开的TLC板放置在薄层色谱质谱接口上，并用激光对准感兴趣的点。

斑点1：TLC清楚地显示出m/z为172和173的典型同位素峰，即未反应的原料溴苯胺的M+H峰。

斑点2: 在m/z 170处的质谱信号，显示为预期的反应产物p-NH2-联苯。

图3  TLC板上斑点的质谱信息

步骤2:TLC到FLASH：纯化化合物

将TLC分离信息拍照上传至puriFlash纯化系统，为馏分收集提供合适的分离方法。用 Plate Express TLC确认后，使用puriFlash XS520进行纯化。我们通过应用程序TLC to Flash（图4），将TLC信息上传至电脑，开始纯化化合物。

对TLC板进行拍照，输入标题等详细信息、标记溶剂前沿和感兴趣的产品、纯化量（400mg）和所用溶剂（环己烷：10%和二氯甲烷：90%）；然后，将数据发送到puriFlash系统，Genius软件将协助构建方法（图5）。

图4：使用TLC to Flash应用程序，拍摄TLC板的照片。化合物将被自动检测出来，点击选择感兴趣的斑点，应用程序会自动计算Rf和δcv (=δk)。最后，在规定区域标明溶剂、比例和备注信息，并发送到puriFlash。

图5：Genius软件上显示的TLC数据，系统根据TLC数据推荐梯度纯化方法。

图6：完成运行后的TLC板和总UV曲线。屏幕显示运行后的总UV谱图（图6），使用触摸屏功能，可以找到馏分中峰的位置，以便下一步进行馏分确认分析。

步骤3:通过CMS和ASAP，30s内鉴定馏分ID。

我们取每种化合物的中间馏分收集液，通过ASAP/CMS进行分析（图7）。

在此馏分中（图8），使用ASAP可以再次看到并确认m/z 170显示预期的反应产物p-NH2-Biphenyl。

快速取样技术是快速确定馏分信息的最后一步，只需将ASAP探头浸入馏分收集管中，然后直接插入质谱进行分析。

图7：将大气固体分析探头(ASAP)浸入其中一个已识别的馏分收集管中，然后插入到质谱仪中，ASAP离子源立即对其进行分析。

图8：可以快速轻松地识别出170 m/z，与预期的结果一致。

总结

expression® CMS，Plate Express TLC和ASAP直接进样分析探头以及puriFlash快速色谱系统的完整工作流程，提供了简便的采样技术，直观的操作软件和先进的检测技术。通过一站式的工作流程，可以轻松、自信的合成、鉴定和纯化化合物。直观的工作流程确保:

1、使用Plate Express TLC和expression® CMS鉴定TLC斑点并进行纯化。

2、使用puriFlash XS520plus和Genius软件，推荐Flash纯化的优化方法。

3、用ASAP直接进样分析探头和expression® CMS对Flash馏分进行鉴定。