人肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒使用介绍

人肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒使用介绍

    许多生长因子已被提纯和确定了其结构组成。如血小板来源的生长因子（PDGF）是个热稳定、具较高正电荷的蛋白质，人肝细胞生长因子由含有二硫键的二聚体组成，分子量30000道尔顿左右。又如表皮生长因子（EGF）是个热稳定、含有53个氨基酸残基的多肽，分子量为6000道尔顿左右。各类生长因子都有其相应的受体，是普遍存在于细胞膜上的跨膜蛋白，不少受体具有激酶活性，特别是酪氨酸激酶活性（如PDGF受体、 EGF受体等）。

　　生长因子有多种，如血小板类生长因子（血小板来源生长因子，PDGF；骨肉瘤来源生长因子ODGF）、表皮生长因子类（表皮生长因子，EGF、转化生长因子，TGFα和TGFβ）、成纤维细胞生长因子（αFGF、βFGF）、类胰岛素生长因子（IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ）、神经生长因子（NGF）、白细胞介素类生长因子（IL-1、IL-1、IL-3等）、红细胞生长素（EPO）、集落刺激因子（CSF）等。

　　由于生长因子是由正常细胞分泌，人肝细胞生长因子既无药物类毒性，也无免疫反应，因此在研究其生理作用机制同时，有的已试用于临床治疗。如白细胞介素-2已用于治疗癌症，对肾癌、黑色素瘤效果明显；也用于免疫调节剂和自家免疫有关的疾病。白细胞介素-3用于治疗骨髓功能衰竭与血小板缺失等适应症。表皮生长因子用于人烧伤、创伤、糖尿病皮肤溃疡、褥疮、静脉曲张性皮肤溃疡和角膜损伤，可促进伤口愈合。

    准备试剂与收集血样

    收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。

    标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成16000pg/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液300ul。在第一管中加入16000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。

    10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。

    洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

    人肝细胞生长因子检测程序

     加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。洗板：同前。每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。洗板：同前。每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。每孔加入100ul终止液混匀。30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

    注意事项；以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。本试剂盒宜置4oC冰箱保存。本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！