小鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

2016-04-19 22:12

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小鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T 25 ng/L-800 ng/L 使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠肿瘤坏死因子α（ TNF-α）。用纯化的小鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α（TNF-α），再与 HRP 标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α（TNF-α）呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。试剂盒组成标本要 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过（HRP）活性。操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后 37℃温育30分钟。 30倍稀释后备用配液：将 30倍浓洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静重复 5次，拍干。 30秒后弃去，如此加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。温育：操作同 3。洗涤：操作同 5。显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。操作程序总：计算以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上，根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD值大于标准品孔第一孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6个月

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