Sensovation多因子检测扫描仪助力猪肠道冠状病毒检测

冠状病毒是有包膜的单链RNA病毒，其刺突蛋白（S蛋白）可与动物身体上的受体细胞结合，继而入侵到动物体内。猪肠道冠状病毒（PECs）是商业猪群中高发的一类冠状病毒，主要包括：流行性腹泻病毒（PEDV）、传染性肠胃炎病毒（TGEV）和猪三角冠状病毒（PDCoV）。目前PECs主要通过RT-PCR、免疫组化和病毒中和检测等方法进行鉴别和诊断。尽管PECs在致病性上存在差异，但它们在临床和组织病理学上都难以区分，因此利用其遗传特性开发新的快速检测手段至关重要。在单个反应体系中同时检测多个标记物，对于快速识别和分类相关病原体是一种尝试手段。S蛋白氨基末端S1亚基的受体结合域是血清学诊断的高敏感性和特异性抗原靶点，本研究则描述了一种基于病毒特异性重组S1蛋白的ELISA样多重平面免疫分析方法，蛋白点印在微孔板底部，同时检测血清样本中的PEDV、TGEV和PDCoV。工作原理与ELISA相似，样本结合强度与阵列中特定病毒抗原靶标的抗体水平相关。

该文章发表在Journal of Immunological Methods杂志，作者来自于美国爱荷华州立大学兽医学院。ELISA对多个病原体的抗体水平检测涉及到多个工作流程，不仅耗时而且也增加了成本和错误风险。使用多重平面免疫分析法，可同时对三种主要的PECs（PEDV、TGEV和PDCoV）进行血清学诊断。微阵列中样本矩阵的独特设计，同比色法相比，不仅减少了试剂消耗也降低了检测成本，而且更快速、更高灵敏度。具体方法：S1蛋白的结构域编码区在质粒载体和HEK293细胞中表达，进行纯化后，分别使用SDS-PAGE和Western blot进行表达结果验证，实验中480份血清样本批次接种PEDV、TGEV（Purdue和Miller亚型）和PDCoV的第（-7、0、7、14、21、28、35和42）天，在微孔板中进行孵育，随后加入特异性识别IgG的酶标抗体，以及底物四甲基联苯胺（TMB）进行显色，并使用德国Sensovation的多因子检测芯片扫描仪进行数据读取和分析，实验设计流程见图1。

图1：A.首先使用葡聚糖对康宁96孔板进行功能化包被，然后对纯化的重组S1蛋白（TGEV，PEDV，PDCoV）和IgG（阳性对照）抗体在板底进行三个重复的点印 B.血清样本在特定的缓冲液中以1：100稀释，100μL/孔加入微孔板，37°C下以300 rpm孵育1小时；用含有0.1%吐温20的PBS洗涤三次（200μL/孔）；每孔中加入100 μL偶联缓冲液，在37°C的避光环境中孵育1小时；洗涤后，每孔加入50 μL不溶性的TMB底物，避光孵育15 min；每孔200μL超纯水洗涤；最后使用Sensovation扫描仪进行单个孔的图像扫描成像。

结果显示：PEDV S1的诊断敏感性为92%（44/48阳性），TGEV S1为100%（95/95阳性），PDCoV S1为98%（47/48阳性），见图2。

图2：A.不同时间截点血清样本IgG反应的检测结果（平均值和标准误差）B.病毒特异性S1抗原（PEDV S1、TGEV S1和PDCoV S1）的血清样本结果分布。

结果表明，AgroDiag PEC多重免疫分析法是一种有效、可靠检测PECs的血清学诊断方法。

Sensovation 成立于2000年。总部位于德国，一直致力于研发和生产科学级成像设备。Sensovation多因子检测芯片扫描仪可对兼容96孔板和各种生物芯片，也可与自动进样装置和液体处理工作站进行整合。在基因组和蛋白组表达，基因突变，病毒微生物检测，肿瘤特异性标志物筛查，自身免疫抗体分析等领域都有非常广泛的应用。

环亚生物，生命科学产品全国性代理商，具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。环亚生物作为Sensovation的大中华区代理商，负责Sensovation产品大中华区的营销和售后支持。

▼更多 Sensovation产品 详情，请联系我们▼

环亚生物科技有限公司

地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室

电话：021-54583565

邮箱：info@apgbio.com

网址：www.apgbio.com

▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼