Pippin HT在回收miRNA测序文库中的应用

背景：microrna长度在18-30bp之间，illumina测序接头长度约为126bp，因此需要将构建的文库中144-156bp回收，并达到上机测序要求浓度200pg/ul。

实验内容：使用total rna样本构建的micro rna文库在pippin ht仪器上进行测试。

目的：将回收范围控制在140-160bp，去除空接头126bp，以及较大片段188 bp。

结果如下：

上样量20ul，回收纯化后体积为10ul。
 

 图1. total rna构建的microrna文库（回收前）

图2. total rna回收后文库 

总结：

使用pippin ht target 145的模式能够回收到的主峰大小在151bp左右，这是microrna文库比较理想的主峰，相应回收得率高于50%。相比繁琐的手工page切胶，pippin ht 只需要38分钟即可完成microrna文库的精确回收，整个过程仪器全自动操作，避免了人为经验的误差和不稳定性。

nebsmall rna 建库试剂盒中有推荐使用sage science 的仪器

nebnext multiplex small rna library prep setfor illumina

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