镍琼脂糖凝胶 FF

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??Q-琼脂糖凝胶FF使用方法分类：??

1.乙醇浸泡：在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干;

2.无盐水浸泡：室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀，然后；

3.盐酸浸泡：在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗只中性；

4.将溶胀好的凝胶脱气后（真空抽滤或超声波）根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；

5.上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；

6.凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-1250px以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1即可；

7.洗脱方法：可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化；

8.在位清洗（CIP）凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以

1000px/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

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原代细胞共性

原代细胞现在广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究，如蛋白质组学、基因组学、细胞株（系）研究、DNA、RNA和遗传学研究等，还应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。原代细胞在生物医药领域有不可替代的作用，市场前景十分广阔。我国原代细胞用于实验才刚刚开始，随着实验要求的提高和全球生物医药研发重心的东移，我国对原代细胞的需求在逐年递增。

除了部分终末分化的细胞，一般的细胞都能传代8-10代及以上，有些细胞甚至更多，但是一般都建议客户采用3-4代以内的细胞。

在原代细胞培养过程中，一般是初次培养过夜后换液，以后每隔2-3天换一次液，以培养液的颜色为标准，一般变黄后就需换液。原代细胞的传代前期一般是3-4天传一次代，后期一般是4-6天传一次代（前期指前三代，后期指三代后）。

四，细胞系（Cell Line） 系由系列传代培养的第一次培养或其中任何阶段培养制备的细胞群（非原始培养细胞）。该细胞群通常是非均质的。

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