Q琼脂糖凝胶FF
??Q-琼脂糖凝胶FF使用方法分类:??
1.乙醇浸泡:在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干;
2.无盐水浸泡:室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀,然后;
3.盐酸浸泡:在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗只中性;
4.将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层;
5.上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
6.凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-1250px以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1即可;
7.洗脱方法:可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;
8.在位清洗(CIP)凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以
1000px/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
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原代细胞共性
原代细胞现在广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究,如蛋白质组学、基因组学、细胞株(系)研究、DNA、RNA和遗传学研究等,还应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。原代细胞在生物医药领域有不可替代的作用,市场前景十分广阔。我国原代细胞用于实验才刚刚开始,随着实验要求的提高和全球生物医药研发重心的东移,我国对原代细胞的需求在逐年递增。
除了部分终末分化的细胞,一般的细胞都能传代8-10代及以上,有些细胞甚至更多,但是一般都建议客户采用3-4代以内的细胞。
在原代细胞培养过程中,一般是初次培养过夜后换液,以后每隔2-3天换一次液,以培养液的颜色为标准,一般变黄后就需换液。原代细胞的传代前期一般是3-4天传一次代,后期一般是4-6天传一次代(前期指前三代,后期指三代后)。
四,细胞系(Cell Line) 系由系列传代培养的第一次培养或其中任何阶段培养制备的细胞群(非原始培养细胞)。该细胞群通常是非均质的。
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