免疫组化试剂盒（适用于兔/小鼠一抗）

免疫组化试剂盒（适用于兔/小鼠一抗）

中文名称： 免疫组化试剂盒（适用于兔/小鼠一抗）

英文名称： Immunohistochemistry Kit(Apply to rabbit or mouse primary antibody)

相关类别： 抗体相关支持试剂

储 存：    冷藏（2-8℃）

概述

该免疫组化试剂盒适用范围为石蜡包埋组织切片，也可用于固定后的冰冻切片。

特点

操作简便：无需太多准备，拿到试剂盒既能开展试验。 重现性好：实验结果重复性高。

应用

用于免疫组织化学实验，两种包装分别可用于20张和50张切片。

使用说明

1. 组织固定：在脱蜡之前，将切片60°C恒温箱中烘烤60分钟。

2. 脱蜡：将切片用二甲苯浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟。

3. 水化：分别用无水乙醇浸泡5分钟；95%乙醇中浸泡5分钟；85%乙醇中浸泡5分钟；75%乙醇中浸泡5分钟。

4. 洗涤：ddH2O浸泡5分钟，清洗3次。

5. 抗原修复（煮沸法）：压力锅中加入足以淹没切片的10 mmol/L的枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0）（配制：将复性剂溶于相应体积 ddH2O中，混匀），加热至沸腾，切片置耐热塑料切片架上，放入锅中，盖好锅盖，扣上压力阀，继续加热，设置保压3 min，时间到后打开放气阀放气，压力归零后开锅盖将内锅取出放置室温冷却，待溶液冷却至室温后取出切片（约30 min）。

6. 洗涤：ddH2O浸泡5分钟，清洗2次，PBST浸泡5分钟，清洗2次。

7. 灭活酶：每张切片滴加50 μl灭活酶试剂，室温避光处理15分钟。

8. 洗涤：PBST浸泡5分钟，清洗3次。（di一次迅速倒掉）

9. 封闭：每张切片滴加3% BSA-PBST 50 μl，湿盒中室温封闭30分钟。

10. 加一抗：弃去封闭液，每张切片滴加50 μl一抗，4℃湿盒中孵育过夜或37°C 1小时。

11. 复温：次日取出切片，室温复温40分钟。

12. 洗涤：PBST浸泡5分钟，清洗3次。（di一次迅速倒掉）

13. 加酶标二抗：每张切片滴加HRP标记的二抗（抗兔/小鼠）25μl，室温或37°C孵育30分钟。

14. 洗涤：PBST浸泡5分钟，清洗3次。（di一次迅速倒掉）

15. 显色（DAB法）：每张切片滴加50 μl显色液（显色液配制：85% ddH2O+ 5% DAB缓冲液+5% DAB底物+5% DAB色原，避光现配现用，按需要量配制），湿盒中显色5分钟。

16. 终止显色：用蒸馏水终止显色反应。

17. 复染：每张切片滴加50 μl苏木素体细胞快速染色液，染色5分钟 ，用蒸馏水冲洗干净。

18. 脱色反蓝：将切片放入1%盐酸~乙醇中脱色3~5秒后迅速取出放入蒸馏水中终止，再放入PBST中反蓝5分钟。

19. 封片：分别在75%乙醇中浸泡5分钟；85%乙醇中浸泡5分钟；95%乙醇中浸泡5分钟；无水乙醇中浸泡5分钟。用二甲苯浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟。之后在切片上加中性树胶，加盖玻片。

20. 观察：显微镜。

组份

复性剂（溶解前请混匀） HRP标记的二抗（抗兔/小鼠） DAB缓冲液（20×） DAB底物（20×） DAB色原（20×） 苏木素体细胞快速染色液