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当前位置：上海士锋生物 > 解决方案 > 血清蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳

血清蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳

2015/05/07 08:11

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发布时间：

2015/05/07

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方案摘要：

．薄膜准备：将薄膜切成2×8cm（或2.5×7cm）的小片，在薄膜的无光泽面一端1.5cm处用铅笔轻轻划一横线，表示点样位置，将薄膜浸入巴比妥缓冲液中充分浸透（浸泡5~10分钟或预先浸泡好，随时取用）后取出，夹于滤纸中，吸去多余的溶液。 2．点样：用血清加样器于无光泽面点样（微量吸管或玻片），沾取血清后垂直轻轻接触加样处，让血清吸入膜内，再拿开加样器。 3．平衡：待血清渗入薄膜，将薄膜无光泽面向下，两端平贴在铺有滤纸或纱布的电泳槽支持板上（加血清的一端贴在电泳槽阴极端）加盖，静置10分钟，使薄膜中的液体获得平衡。 4．电泳：电压：约110~140V（或相当于电场强度10V/cm）。电流：0.4~0.6mA/cm宽时间：45~60分钟。 5．染色：电泳停止，关闭电源，将薄膜从电泳槽中取出，直接浸入氨基黑染色液中，染色3~5分钟，从染色液中取出薄膜，浸入漂洗液中漂洗脱色数次，至薄膜背景完全无色为止，取出薄膜用滤纸吸干。 6．定量：将漂洗后的薄膜夹于滤纸中吸干，剪下各蛋白区带，分别置于试管中，另于空白区剪一平均大小的薄膜放入空白管中，清蛋白管中加0.4MNaOH4ml,其余各加5ml，反复振摇使其充分洗脱，放30分钟后比色（波长650nm），以空白管调光密度到0点，读记各蛋白质的光密度值。光密度总和（T）=2A α1 α2 β γ A清蛋白%=（2A/T）×100% α1球蛋白%=（α1/T）×100% α2球蛋白%=（α2/T）×100% β球蛋白%=（β/T）×100% γ球蛋白%=（γ/T）×100% 7.透明保存：将染色漂洗后晾干的薄膜条浸入新鲜配制的透明液中经2~3分钟，贴在玻璃板上，干后即成透明薄膜，可保存或用吸光度计直接测定各区带的吸光度。注：容易产生的几种现象

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