您好,欢迎访问仪器信息网
注册
上海士锋生物科技有限公司

关注

已关注

已认证

粉丝量 0

400-860-5168转2972

仪器信息网认证电话,请放心拨打

当前位置: 上海士锋生物 > 资料中心 > DNA体外连接

DNA体外连接

2015-11-30 07:46

浏览:159

分享:

资料摘要:

利用dna连接酶把目的DNA片段和载体DNA连接在一起,成为一个新的重组分子。目的DNA片段被限制酶消化后其末端只可能有3种形式: (1)带有相同的粘性末端:用同一种酶或同尾酶处理可得这样的末端。由于质粒载体也必须用同样的酶消化,亦得两个相同的粘性末端,因此在连接反应中,外源目的基因片段和质粒载体DNA均可能发生自身环化,而且正反两种连接方向都有。为防止载体DNA自身环化,在连接前需除去载体分子的5’-P,使之最大限度地抑制载体环化现象。 (2)带有非互补的粘端:用两种不同的限制酶进行消化可以产生这样的末端、一般情况下,常用质粒载体的多克隆位点总能找到若干个不同的酶单酶切位点;用两种酶分别消化载体和目的DNA后,可将外源目的片段定向克隆到载体上。 (3)带有平末端:由产生平末端的限制酶或核酸外切酶消化产生,或由dna聚合酶Klenow片段补平3’凹陷,使不相匹配的末端转变为平端。 成功的连接反应需纯净的目的dna片段和载体DNA一般采用插入片段(目的DNA)与载体DNA分子数比为3~5:1。目的基因比例太多,易产生基因自连后插入载体的多聚体。根据插入片段和载体的分子量大小计算连接反应体系中需要加入的各DNA片段含量,计算公式如下: DNA体外连接 【器材】 1.水浴箱 2.eppendorf 管 3.离心机 【试剂】 1.T4 DNA连接酶/10×T4 连接酶缓冲液 2.牛小肠碱性磷酸酶(CIP)/10×CIP缓冲液 3.0.5mol/L EDTA 【操作步骤】 1.建立下列去磷酸基团的反应体系: 10×CIP 缓冲液 2μl 线性化载体(已酶切) 10μl CIP 1μl ddH2O 7μl 2.37℃水浴 1h。 3.加入2μl 0.5mol/L EDTA, 65℃灭活 15min。 4.经酚/氯仿抽提,乙醇沉淀后,TE溶解DNA。 5.在Ep 管中建立连接反应体系: 10×连接缓冲液 2μl DNA片段(0.2μg)    2μl 线性化的载体DNA(0.1μg) 2μl T4DNA连接酶 1μl ddH2O 13μl 6.混匀,16℃反应数小时(5-12h)。

下载本篇资料:

资料文件名:
资料大小
下载
士锋图标.JPG
19KB

相关资料

英文名称:PLP;Pyridoxal-5-phosphatemonohydrate;Pyridoxal-5-monophosphoricacidester;3-Hydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-methylisonicotinaldehyde5-phosphate;Codecarboxylase 其他名称:5-磷酸吡哆醛;吡多醛5-单磷酸酯;3-羟基-2-甲基-5-[(膦酰氧基)甲基]-4-吡啶甲醛一水合物;磷酸吡醛素;吡哆醛-5-磷酸酯;3-羟基-5-羟甲基-2-甲基异烟酰;辅脱羧酶 CAS号:41468-25-1 C8H10NO6P?H2O=265.15 级别:AR 含量:≥99.0% 维生素B6:≤0.5% 干燥失重:≤10.0% 重金属:≤20ppm PH(0.25%agSolution):2.6~3.0 性状(以下信息仅供参考):类白色至淡黄色或黄色粉末。熔点140~143℃。几乎无气味。无味。见光缓慢分解。易溶于甲酸、含水吡啶和稀碱液,微溶于水、乙醇、丙酮、乙醚、氯仿和苯。水溶液在冷而避光处很稳定,0℃时3周

阿尔茨海默病(AD)是一种全球范围内患病人口较多的神经退行性疾病。 自发病起,患者的认知功能会逐渐衰退,病理表现为大脑中β淀粉样蛋白(Aβ)的累积、过度磷酸化的tau蛋白导致的神经纤维缠结以及神经炎症。 cGAS-STING通路是哺乳动物细胞检测外源DNA,并激活先天免疫反应的重要通路。它在缺血性脑损伤、帕金森病、亨廷顿病、脊髓侧索硬化症等神经疾病的发生发展中有重要作用,但是,cGAS-STING通路是否参与AD仍不清楚。 近日,由中国科学院昆明动物研究所的曾健雄和美国南加州大学的赵振领衔的研究团队,在国际顶尖杂志《自然·衰老》发表关于cGAS-STING通路参与AD的最新研究成果[1]。 他们发现在人类AD患者和衰老小鼠大脑中,cGAS与细胞质中的双链DNA结合,激活cGAS-STING通路,而敲除Cgas可以抑制AD模式小鼠的Aβ累积、神经炎症以及认知衰退。 他们还发现,STING抑制剂H-151可以显著抑制AD模式小鼠大脑中cGAS-STING通路的激活,抑制AD病理进程。 总的来说,这项研究揭示了先天免疫通路cGAS-STING和AD之间的重要联系,靶向

英文名称:Estradiol;1,3,5-Estratriene-3,17beta-diol;17beta-Estradiol;3,17beta-Dihydroxy-1,3,5(10)-estratriene;Dihydrofolliculin 其他名称:β-雌二醇;雌甾二醇;雌甾-1,3,5-(10)-三烯-3β,17β-二醇;β-1,3,5(10)-三烯-3,17β-二醇;3,17β-二羟基-1,3,5(10)-雌甾三烯-3,17β-二醇;β-雌激素 CAS号:50-28-2 C18H24O2=272.38 含量:≥98.0% 熔点:173~179℃ 比旋光度:+76~+83°(C=2,5mol/LHCl) 水分:≤3.5%(KARLFISCHER) 性状(以下信息仅供参考):白色或乳白结晶性粉末;无臭。本品在二氧六环、丙酮中溶解,在乙醇中略溶,在水中不溶。比旋度取本品,精密称定,加二氧六环溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液,依法测定。 用途:本品仅供科研,不得用于其它用途。 保存:2~8°C

紫杉醇是目前已发现的最优秀的天然抗癌药物。紫杉醇生物合成途径已研究多年,而超大的基因组和复杂的代谢路线是途径解析的主要限制因素。中国科学院天津工业生物技术研究所与西北工业大学、深圳华大生命科学研究院等合作,首次完成了喜马拉雅红豆杉超10Gb的染色体水平的全基因组测序,并通过复杂基因组组装与分析,解析了红豆杉中生物合成紫杉醇的关键基因簇,探索了紫杉醇合成途径的起源与进化机制,为完全解析紫杉醇生物合成途径奠定了重要基础。 全基因组倍增事件是开花植物提升环境适应能力,并逐渐替代裸子植物,遍布地球的主要原因。通过对裸子植物喜马拉雅红豆杉基因组的进化分析,研究发现在地球上存活更久的红豆杉却几乎没有经历过明显的全基因组倍增事件,而是发生了大量的基因串联重复事件,其比例超过了几乎所有已知的开花植物。大量基因串联重复导致红豆杉中的一些基因家族急剧扩张,随着这些家族重复基因的功能分化,红豆杉进化出非常复杂的代谢物合成和转录调控网络。例如,与紫杉醇合成密切相关的细胞色素P450酶家族与酰基转移酶家族,通过串联复制都产生了超过50份基因拷贝,如此多的重复基因为红豆杉进化出极其复杂的紫杉醇合成途径提供了遗传基础。迄今为止,已在紫杉科的植物中发现了超过500种具有紫杉烷类天然产物。因此,大量的基因串联重复是红豆杉中紫杉醇合成途径形成的主要进化机制,也可能是红豆杉能在地球上存活至今的重要原因之一

推荐产品
供应产品

手机版:

DNA体外连接

上海士锋生物科技有限公司

沟通底价

提交后,商家将派代表为您专人服务

获取验证码

{{maxedution}}s后重新发送

获取多家报价,选型效率提升30%
提交留言
点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》 且同意关注厂商展位
联系方式:

公司名称: 上海士锋生物科技有限公司

公司地址: 上海宝山区锦乐路957弄 联系人: 王小姐 邮编: 201900

主营产品:

仪器信息网APP

展位手机站