蛋白质定量

2015-05-25 07:34

浏览：106次

资料摘要：

一、Bradford法该方法用于大多数蛋白质定量是相当精确的，特别是用于小分子多肽定量。如核糖核酸酶或溶菌酶等。但是，去污剂的浓度超过0.2%则影响定量结果。如TritonX-100，SDS，NP-40等。 1. Bradford染液配制：将100mg考马斯亮蓝溶于50 ml 95%的乙醇中，加入100ml 浓磷酸，然后，用双蒸水补充至200ml，放4C至少6个月。 2. 作标准曲线的蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准蛋白，例如进行抗体定量，可用纯化的抗体作为标准蛋白。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20μg-150μg/100μl之间绘制标准曲线。 3. 将待测样本溶于100μl缓冲溶液中，该缓冲溶液应于作标准曲线的缓冲溶液相同； 4. 按1：5用双蒸水稀释浓染料结合溶液，过滤离心沉淀物； 5. 每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5-30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，即可在595nm光波长下测定其吸光度。注意，颜色反应不得超过30min； 6. 应用标准曲线计算待测样本的浓度。注意：应用Bradford法测定BSA的值是其重量的两倍。二、Bradford斑点试验该方法特别适用于检测洗脱组分，以定位蛋白洗脱液。例如检测洗脱液的吸附力的强弱。 1. 首先，浓缩Bradford染液。将100mg考马亮蓝溶于50 ml 95%的乙醇中，加入100ml 浓磷酸，然后，用双蒸水补充至200ml，放4C至少6个月。这种染液也可从Bio-Rad公司购到； 2. 将8μl待测蛋白质样本转移至一条Parafilm，Saran Wrap上或微孔板孔中。同时应设一洗脱液样本作为空白对照； 3. 每个样本孔中加2μl浓Bradford染液并混匀； 4. 大约2min后，含有蛋白质的样本将变蓝。该方法的灵敏度约为10μg/ml。此反应对去污剂的浓度超过0.2%时非常敏感。但KCl，NaCl，MgCl2 或EDTA对其无影响，Tris对其仅有轻微的影响。三、Coomassie 斑点试验该方法特别适用于检测洗脱组分以定位蛋白洗脱液。例如检测洗脱液的吸附力的强弱。 1. 裁剪3MM厚的Whatman 纸约4mm2 ； 2. 每个样本点5μl于Whatman 纸上； 3. 自然干燥样本或用电吹风吹干斑点，约1min或更少； 4. 将纸块浸入0.25%的考马斯亮蓝溶液中（考马斯亮蓝溶于10%的甲醇，7%醋酸中） 30min； 5. 将纸块放入10%的甲醇，7%醋酸溶液中洗涤3-5 min，然后干燥。四、紫外分光度检测法蛋白质紫外光吸光率是所有的蛋白质定量方法中最快的方法。通常在280nm光波长下读数。其在280nm光波长下的最大吸光率主要处决于酪氨酸和色氨酸的存在。在205nm光波长的吸收也常用到。其在205nm光波长下的最大吸光率主要处决于肽链，尽管氨基酸也有影响。另外，一个主要的优点是在测定蛋白质浓度时，样本不会遭到损害。 1、纯蛋白质溶液： ① 在280nm光波长下读取与适当的对照相比较的吸光率； ② 对于抗体和BSA，可应用下表计算其浓度对其他蛋白质可粗约地估计：1个单位吸光率相当于1mg/ml。蛋白质 A280 (1mg/ml) IgG 1.35 IgM 1.2 BSA 0.7 2、含有核苷酸的蛋白质溶液 ① 在280nm和260nm或280nm和205nm光波长下读取与适当的对照相比较的吸光率； ② 用下列等式粗略计算其浓度：蛋白质浓度（mg/ml）=(1.55×A280 )-(0.76×A260 ) 蛋白质浓度（mg/ml）= A205 /(27 + 120 A280/ A205 )

下载本篇资料：

资料文件名：

资料大小

下载

复件公司logo001.PNG

50KB

免费下载

微量凯氏（kjeldahl）定氮法测蛋白质含量

凝胶电泳操作注意事项

相关资料

葡萄糖测定试剂盒(葡萄糖氧化酶一过氧化物酶法)

英文名称：PLP；Pyridoxal-5-phosphatemonohydrate；Pyridoxal-5-monophosphoricacidester；3-Hydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-methylisonicotinaldehyde5-phosphate；Codecarboxylase 其他名称：5-磷酸吡哆醛；吡多醛5-单磷酸酯；3-羟基-2-甲基-5-[(膦酰氧基)甲基]-4-吡啶甲醛一水合物；磷酸吡醛素；吡哆醛-5-磷酸酯；3-羟基-5-羟甲基-2-甲基异烟酰；辅脱羧酶 CAS号：41468-25-1 C8H10NO6P?H2O=265.15 级别：AR 含量：≥99.0% 维生素B6：≤0.5% 干燥失重：≤10.0% 重金属：≤20ppm PH(0.25%agSolution)：2.6～3.0 性状(以下信息仅供参考)：类白色至淡黄色或黄色粉末。熔点140～143℃。几乎无气味。无味。见光缓慢分解。易溶于甲酸、含水吡啶和稀碱液，微溶于水、乙醇、丙酮、乙醚、氯仿和苯。水溶液在冷而避光处很稳定，0℃时3周

微生物检测冻干粉质控菌种说明书

阿尔茨海默病（AD）是一种全球范围内患病人口较多的神经退行性疾病。自发病起，患者的认知功能会逐渐衰退，病理表现为大脑中β淀粉样蛋白（Aβ）的累积、过度磷酸化的tau蛋白导致的神经纤维缠结以及神经炎症。 cGAS-STING通路是哺乳动物细胞检测外源DNA，并激活先天免疫反应的重要通路。它在缺血性脑损伤、帕金森病、亨廷顿病、脊髓侧索硬化症等神经疾病的发生发展中有重要作用，但是，cGAS-STING通路是否参与AD仍不清楚。近日，由中国科学院昆明动物研究所的曾健雄和美国南加州大学的赵振领衔的研究团队，在国际顶尖杂志《自然·衰老》发表关于cGAS-STING通路参与AD的最新研究成果[1]。他们发现在人类AD患者和衰老小鼠大脑中，cGAS与细胞质中的双链DNA结合，激活cGAS-STING通路，而敲除Cgas可以抑制AD模式小鼠的Aβ累积、神经炎症以及认知衰退。他们还发现，STING抑制剂H-151可以显著抑制AD模式小鼠大脑中cGAS-STING通路的激活，抑制AD病理进程。总的来说，这项研究揭示了先天免疫通路cGAS-STING和AD之间的重要联系，靶向

雌二醇特价促销 350/25g

英文名称：Estradiol；1,3,5-Estratriene-3,17beta-diol；17beta-Estradiol；3,17beta-Dihydroxy-1,3,5(10)-estratriene；Dihydrofolliculin 其他名称：β-雌二醇；雌甾二醇；雌甾-1,3,5-(10)-三烯-3β,17β-二醇；β-1,3,5(10)-三烯-3,17β-二醇；3,17β-二羟基-1,3,5(10)-雌甾三烯-3,17β-二醇；β-雌激素 CAS号：50-28-2 C18H24O2=272.38 含量：≥98.0% 熔点：173～179℃ 比旋光度：+76～+83°(C=2,5mol/LHCl) 水分：≤3.5%(KARLFISCHER) 性状(以下信息仅供参考)：白色或乳白结晶性粉末；无臭。本品在二氧六环、丙酮中溶解，在乙醇中略溶，在水中不溶。比旋度取本品，精密称定，加二氧六环溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定。用途：本品仅供科研，不得用于其它用途。保存：2~8°C

红豆杉染色体水平基因组测序完成

紫杉醇是目前已发现的最优秀的天然抗癌药物。紫杉醇生物合成途径已研究多年，而超大的基因组和复杂的代谢路线是途径解析的主要限制因素。中国科学院天津工业生物技术研究所与西北工业大学、深圳华大生命科学研究院等合作，首次完成了喜马拉雅红豆杉超10Gb的染色体水平的全基因组测序，并通过复杂基因组组装与分析，解析了红豆杉中生物合成紫杉醇的关键基因簇，探索了紫杉醇合成途径的起源与进化机制，为完全解析紫杉醇生物合成途径奠定了重要基础。全基因组倍增事件是开花植物提升环境适应能力，并逐渐替代裸子植物，遍布地球的主要原因。通过对裸子植物喜马拉雅红豆杉基因组的进化分析，研究发现在地球上存活更久的红豆杉却几乎没有经历过明显的全基因组倍增事件，而是发生了大量的基因串联重复事件，其比例超过了几乎所有已知的开花植物。大量基因串联重复导致红豆杉中的一些基因家族急剧扩张，随着这些家族重复基因的功能分化，红豆杉进化出非常复杂的代谢物合成和转录调控网络。例如，与紫杉醇合成密切相关的细胞色素P450酶家族与酰基转移酶家族，通过串联复制都产生了超过50份基因拷贝，如此多的重复基因为红豆杉进化出极其复杂的紫杉醇合成途径提供了遗传基础。迄今为止，已在紫杉科的植物中发现了超过500种具有紫杉烷类天然产物。因此，大量的基因串联重复是红豆杉中紫杉醇合成途径形成的主要进化机制，也可能是红豆杉能在地球上存活至今的重要原因之一

产品推荐