基因芯片实验中的细胞和组织制备规程

2014-07-17 07:06

浏览：144次

资料摘要：

一个完整的基因芯片实验包括以下几个步骤：研究课题的提出、芯片设计、样品制备、杂交反应、数据分析和处理。本文主要介绍其中的样品制备(细胞标本采集和组织标本采集)的建议做法。细胞标本采集操作建议规程 1. 所有样品均应有样品标签(注明样品编号)，同时有一张样品登记表，写明样品名称、种类、编号、取样日期、样品处理情况等。 2. 一张芯片实验一般要求细胞数在1E+08，建议设计实验和收获细胞时可考虑多收集一些。 3. 贴壁与悬浮细胞培养诱导结束后，去除培养液，保留的细胞用PBS缓冲液洗一下，除去缓冲液，加溶液D*充分溶解细胞，放入液氮运输。样品量以实际得到的total RNA为准。 4. 血液：将白细胞分离出来，加溶液D充分溶解细胞，放入液氮运输。样品量以实际得到的total RNA为准。 5. 如果是细胞未经溶液D处理，直接冻入液氮罐(不推荐)。工作人员会对细胞作相关处理，以便为细胞记数。 6. 以上提到的均是新鲜细胞，对一些已老化或质量不明的细胞，工作人员有权提出疑义，并要求退回或重新取样。不同组织抽提3-10μg mRNA所需组织量器官/组织* 提取3μgmRNA所需组织量(克) 提取10μgmRNA所需织量(克) 总RNA得率[单位:毫克RNA/克组织] mRNA所占百分比[%] 成人正常组织肝 0.2083 0.6944 1.80 - 1.80 mg/g 0.80 成人正常组织脑缺数据缺数据 1.30 - 1.30 mg/g 缺数据成人正常组织肺 0.3000 1.0000 1.00 - 1.00 mg/g 1.00 成人正常组织心 0.5000 1.6667 0.60 - 0.60 mg/g 1.00 成人正常组织胃 0.1852 0.6173 2.70 - 2.70 mg/g 0.60 成人正常组织喉 0.3125 1.0417 1.20 - 1.20 mg/g 0.80 病理组织结肠癌 0.2521 0.8403 1.70 - 1.70 mg/g 0.70 病理组织胃癌 0.4317 1.4388 0.50 - 0.50 mg/g 1.39 病理组织空肠腺癌 0.3571 1.1905 1.40 - 1.40 mg/g 0.60 病理组织直肠癌 0.1604 0.5348 1.70 - 1.70 mg/g 1.10 病理组织肝癌 0.1116 0.3720 3.84 - 3.84 mg/g 0.70 病理组织肺癌 0.1282 0.4274 2.00 - 2.00 mg/g 1.17 考虑到个体差异以及样品在研磨、匀浆等过程中的损失，客户提供的样品量应在上述基础上增加1-2倍。组织标本采集操作建议规程铝箔经DEPC水浸泡过夜，78°C烘干，高压灭菌后烘干 1.5 ml 微离心管 15 ml 聚丙烯离心管市场有售RNAase-Free的相应规格离心管标签纸记号笔样

下载本篇资料：

资料文件名：

资料大小

下载

方法1.docx

22KB

免费下载

人可溶性CD163分子（sCD163）试剂盒使用说明书

人胱天蛋白酶8（Caspase-8）试剂盒使用说明书

相关资料

葡萄糖测定试剂盒(葡萄糖氧化酶一过氧化物酶法)

英文名称：PLP；Pyridoxal-5-phosphatemonohydrate；Pyridoxal-5-monophosphoricacidester；3-Hydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-methylisonicotinaldehyde5-phosphate；Codecarboxylase 其他名称：5-磷酸吡哆醛；吡多醛5-单磷酸酯；3-羟基-2-甲基-5-[(膦酰氧基)甲基]-4-吡啶甲醛一水合物；磷酸吡醛素；吡哆醛-5-磷酸酯；3-羟基-5-羟甲基-2-甲基异烟酰；辅脱羧酶 CAS号：41468-25-1 C8H10NO6P?H2O=265.15 级别：AR 含量：≥99.0% 维生素B6：≤0.5% 干燥失重：≤10.0% 重金属：≤20ppm PH(0.25%agSolution)：2.6～3.0 性状(以下信息仅供参考)：类白色至淡黄色或黄色粉末。熔点140～143℃。几乎无气味。无味。见光缓慢分解。易溶于甲酸、含水吡啶和稀碱液，微溶于水、乙醇、丙酮、乙醚、氯仿和苯。水溶液在冷而避光处很稳定，0℃时3周

微生物检测冻干粉质控菌种说明书

阿尔茨海默病（AD）是一种全球范围内患病人口较多的神经退行性疾病。自发病起，患者的认知功能会逐渐衰退，病理表现为大脑中β淀粉样蛋白（Aβ）的累积、过度磷酸化的tau蛋白导致的神经纤维缠结以及神经炎症。 cGAS-STING通路是哺乳动物细胞检测外源DNA，并激活先天免疫反应的重要通路。它在缺血性脑损伤、帕金森病、亨廷顿病、脊髓侧索硬化症等神经疾病的发生发展中有重要作用，但是，cGAS-STING通路是否参与AD仍不清楚。近日，由中国科学院昆明动物研究所的曾健雄和美国南加州大学的赵振领衔的研究团队，在国际顶尖杂志《自然·衰老》发表关于cGAS-STING通路参与AD的最新研究成果[1]。他们发现在人类AD患者和衰老小鼠大脑中，cGAS与细胞质中的双链DNA结合，激活cGAS-STING通路，而敲除Cgas可以抑制AD模式小鼠的Aβ累积、神经炎症以及认知衰退。他们还发现，STING抑制剂H-151可以显著抑制AD模式小鼠大脑中cGAS-STING通路的激活，抑制AD病理进程。总的来说，这项研究揭示了先天免疫通路cGAS-STING和AD之间的重要联系，靶向

雌二醇特价促销 350/25g

英文名称：Estradiol；1,3,5-Estratriene-3,17beta-diol；17beta-Estradiol；3,17beta-Dihydroxy-1,3,5(10)-estratriene；Dihydrofolliculin 其他名称：β-雌二醇；雌甾二醇；雌甾-1,3,5-(10)-三烯-3β,17β-二醇；β-1,3,5(10)-三烯-3,17β-二醇；3,17β-二羟基-1,3,5(10)-雌甾三烯-3,17β-二醇；β-雌激素 CAS号：50-28-2 C18H24O2=272.38 含量：≥98.0% 熔点：173～179℃ 比旋光度：+76～+83°(C=2,5mol/LHCl) 水分：≤3.5%(KARLFISCHER) 性状(以下信息仅供参考)：白色或乳白结晶性粉末；无臭。本品在二氧六环、丙酮中溶解，在乙醇中略溶，在水中不溶。比旋度取本品，精密称定，加二氧六环溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定。用途：本品仅供科研，不得用于其它用途。保存：2~8°C

红豆杉染色体水平基因组测序完成

紫杉醇是目前已发现的最优秀的天然抗癌药物。紫杉醇生物合成途径已研究多年，而超大的基因组和复杂的代谢路线是途径解析的主要限制因素。中国科学院天津工业生物技术研究所与西北工业大学、深圳华大生命科学研究院等合作，首次完成了喜马拉雅红豆杉超10Gb的染色体水平的全基因组测序，并通过复杂基因组组装与分析，解析了红豆杉中生物合成紫杉醇的关键基因簇，探索了紫杉醇合成途径的起源与进化机制，为完全解析紫杉醇生物合成途径奠定了重要基础。全基因组倍增事件是开花植物提升环境适应能力，并逐渐替代裸子植物，遍布地球的主要原因。通过对裸子植物喜马拉雅红豆杉基因组的进化分析，研究发现在地球上存活更久的红豆杉却几乎没有经历过明显的全基因组倍增事件，而是发生了大量的基因串联重复事件，其比例超过了几乎所有已知的开花植物。大量基因串联重复导致红豆杉中的一些基因家族急剧扩张，随着这些家族重复基因的功能分化，红豆杉进化出非常复杂的代谢物合成和转录调控网络。例如，与紫杉醇合成密切相关的细胞色素P450酶家族与酰基转移酶家族，通过串联复制都产生了超过50份基因拷贝，如此多的重复基因为红豆杉进化出极其复杂的紫杉醇合成途径提供了遗传基础。迄今为止，已在紫杉科的植物中发现了超过500种具有紫杉烷类天然产物。因此，大量的基因串联重复是红豆杉中紫杉醇合成途径形成的主要进化机制，也可能是红豆杉能在地球上存活至今的重要原因之一

产品推荐