如何进行抗原修复

2013-07-25 07:50

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资料摘要：

(一)为什么要进行抗原修复? 组织在制作过程中，由于化学试剂的作用封闭了抗原，又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲，致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来，为了解决上述的问题，利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。在免疫组化染色后的镜下观察中，有发现这样的结果，阳性物反应不强，时隐时现，表达不均匀，有时可出现假阴性，这是因为： 1.组织在用甲醛固定的过程中所形成的醛键可封闭抗原的决定族。甲醛与组织蛋白质类的反应是多样而复杂的，因为它能和多种不同的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键8。这也是甲醛的一个作用，因为它是一种聚合固定剂，因而能在相邻的蛋白质键间形成桥键的作用。 2. 甲醛在保存进程中会形成羟甲基，也可封闭抗原决定族。据French和Edsall的研究认为，最常遇到的甲醇反应，就是加到一个含反应性氢原子的化合物中，形成一个羟甲基化合物。 3.在组织固定过程中，甲醛与蛋白质发生交联，形成醛交联蛋白，这种化合物封闭了抗原，使之无法表达出来。为了解决上述存在的问题，更好地暴露出抗原，将其很好地显示出来，目前世界上公认的方法就是必须进行抗原修复。 (二) 用什么方法进行抗原修复? 至今为止，抗原修复有许多种方法，在这些方法中，有的是根据抗体的要求来进行，有的是根据抗原的表达程度来进行，我们则对每种病例每项检测，都要求必须进行抗原修复，以达到抗原全面表达的最佳状态。 (1)物理化学试剂抗原修复法。 1. 真空负压抗原修复法： ① 切片脱蜡至水。 ②0.3%H2O2甲醇真空负压处理5分钟。 ③自来水洗，蒸馏水洗。 ④0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH6.0)，真空负压干燥箱预先调至95℃，真空负压处理10分钟。 ⑤待修复注降至室温的一，PBS洗3次，随后按选好的免疫组化染色方法进行染色。 2.微波辐射抗原修复法： ①切片脱蜡至水。 ②0.3%H2O2甲醇处理10分钟。 ③自来水洗，蒸馏水洗。 ④ 0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH6.0)，于微波炉内微波辐射10分钟，如检测Er和Pr则需要20辐射分钟左右。 ⑤待修复液降至室温后，PBS洗3次，随后按选好的免疫组织化学的染色方法进行染色。 3.高压抗原修复法： ①切片脱蜡至水。 ②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。 ③自来水洗，蒸馏水洗。 ④切片放入抗原修复液中，边同容器放入高压锅中加热至沸腾。盖上压力阀至喷汽后持续1-4分钟。 ⑤待修复液恢复至室温后，PBS洗3次，随后按选好的免疫组织化学染色方法进行染色。 4.隔水热抗原修复法： ①切片脱蜡至水。 ②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。 ③自来水洗，蒸馏水洗。 ④切片放入0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH0.6)中，边同容器一起放入水溶锅中加热，其间应不断用温度计测其温度，待抗原修复液的温度达到有效温度后(92℃↑)。即开始计时，持续40分钟。 ⑤待抗原修复液恢复至室温后，PBS洗3次，随后按选定好的免疫组化染色方法进行染色。 5.电炉加热抗原修复法： ①切片脱蜡至水。 ②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。 ③自来水洗，蒸馏水洗。 ④ 将切片放入抗原修复液中于电炉上加热，不时用温度计测量温度，当达92℃后，即可拔离电源，当温度低于92℃时，再插上电源，如此反复持续至10分钟左右。 ⑤待抗原修复液降至室温后，PBS洗3次，随后按选定的免疫组化染色方法进行染色。对各种抗原修复方法的评价。

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