漆酶（Laccase ）试剂盒说明书

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高等植物中，具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解

以及生物检测方面有非常广泛的应用。

测定原理

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

工作液：粉剂×2 瓶，4℃避光保存，临用前加7.5mL试剂一溶解。

酶液提取

1． 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2． 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后 4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

3． 细胞培养液：直接检测。

测定操作表

酶活性计算公式

a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1．按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶活性（nmol/min/mg prot）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 65×△ A÷Cpr

2．按照样本质量计算

酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶活性（nmol/min /g）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 65×△ A÷W

3．按照细胞数量计算

酶活性定义：每10⁴个细胞每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶活性（nmol/min/10⁴cell）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T