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白细胞介素-2(interleukin-2;IL-2 )

2015-07-27 09:47

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资料摘要:

其他名称:T细胞生长因子(T cell growth factor,TCRF) 定义:主要由活化的CD4+T细胞和CD8+T细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因子。是所有T细胞亚群的生长因子,并可促进活化B细胞增殖,故为调控免疫应答的重要因子,也参与抗体反应、造血和肿瘤监视。 【中文名称】: 白细胞介素-2 【简写拼音】: BXBJS-2 【英文名称】: Interleukin-2 【所属类别】: 免疫增强剂||其他抗肿瘤药及辅助治疗药 【别名】 白间素, 欣吉尔, T细胞生长因子 ,白细胞介素-2 【外文名】Interleukin-2 ,IL-2 【适应症】 白介素-2是一个分子量为14500的糖蛋白,它刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的T细胞增殖。重组白介素-2可用于临床研究。主要用于肾癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效(Rossenberg)。LAK细胞代表1个有单核巨噬细胞,B和T淋巴细胞特征的异原的细胞体。这些LAK细胞似乎对癌细胞有特异作用。此外,LAK细胞(不象T细胞)介导杀伤不受MHC的约束。[1] 1 材料和方法:   1.1 制备粗制IL-2无菌采血,肝素抗凝,用RPMI1640按1∶1将血液稀释,然后重层于菲可液面上,以1 500r/min离心30min,取白细胞层,用RPMI1640洗2次,按1~3×10细胞/ml浓度加入10%胎牛血清RPMI1640,注入一装有磁棒的大瓶中,置37℃搅拌培养4天,取出,分装于50ml离心管中,1 500r/min离心20min,弃上清液,将细胞悬浮于1%胎牛血清RPMI1640培养液中,使细胞浓度为106细胞/ml。同时加入纯质PHA1~2μg/ml以及多种B淋巴母细胞株,使其浓度为106细胞/ml,37℃搅拌培养18~24h后,取出以1500r/min离心30min,取上清,用045μg滤膜过滤除菌,滤液即为粗制IL-2。  2 制备精品IL2   2.1 硫酸铵沉淀与真空浓缩透析:在4℃下将硫酸铵粉末按50%饱和量加入上述粗制IL-2中,搅拌2h,12000g离心30min,取上清液,再加入80%饱和硫酸铵,4℃过夜,次日以12000g离心30min,弃上清液,将沉淀溶于1% PEG 6 000的1∶2 PBS溶液(pH值73)中,置真空负压浓缩透析器中透析浓缩至所需容量。   2.2 Sephadex G100凝胶过滤:用2×180cm的过滤柱及PBS(同上),以80ml/h流速过滤。将各管洗脱液用紫外分光光度计280nm检测其OD值。同时将几种不同分子量的标准蛋白也用相同条件过滤及检测其OD值,绘出IL-2及标准蛋白OD值的曲线。将各管洗脱液过滤除菌后,作白细胞生物活性试验,按试验结果绘出曲线,找出具有最高IL2活性的几管洗脱液,混合后,作下一步精制。   2.3 BlueSepharose层析:将上述混合后的洗脱液加入BlueSepharose柱中,流速约15ml/h,按每管10ml收集流出液,当样品全部流出柱中以后,用上述PBS洗涤样品柱,再用梯度NaCl溶液(从0075mol/L至06mol/L NaCl的PBS溶液)洗脱,按2ml/管收集洗脱液。NaCl 溶液梯度及流速均由梯度混合器调节控制。洗脱完毕后,作各管OD值及NaCl浓度的测定。各管洗脱液过滤除菌后,作出生物活性测定。将峰值前后的数管洗脱液混合,即为精制的IL2。置-20℃冰箱保存。   3 检定   3.1 活性测定用10%胎牛血清RPMI1640将上述IL2稀释为50%、25%、125%、625%,而后再将每个百分浓度以及100%浓度的IL2倍比稀释,自1∶2至1∶128,将每个稀释度分别加入多孔板的孔中,每孔01ml。然后取CT6细胞株(小鼠的IL2依赖性T细胞株),调整浓度为106细胞/ml,每孔加入01ml,同时用培养基代替IL2作对照。将多孔板培养24h后,取出按每孔1μci的浓度加H3标记胸腺嘧啶核苷继续培养4h。取出后用MESHⅡ细胞收集器过滤洗涤细胞,用β计数器测定各孔细胞的cpm。必要时按此结果绘出曲线,确定活性单位。

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请问贵公司的抗酒石酸酸性磷酸酶(StrACP)测试盒与TRACP试剂盒是一种东西吗?该测试盒可以检测小鼠RAW264.7(巨噬)细胞上清液中的TRAP含量吗? 回复:trACP与strACP都是指的抗酒石酸酸性磷酸酶,只是英文缩写不同。这个试剂盒属于生化试剂盒,不分种属特异性。细胞中的相应活力可以测定,一般要求细胞数量级在106个/ml密度;大概在6孔板进行培养、收集,并进行破碎处理。 最新产品:TGMD溶液 "货号:CC0100 规格:100ml 储存条件:4℃,6个月 用途:肥大细胞培养 注意事项:主要由Tyrode液、明胶、氯化镁、DNA酶组成。" 抗体储存液 "货号:PZ0050 规格:100ml 储存条件:4℃,24个月 用途:抗体保存液,抗体稳定性好,保存时间长。 注意事项:无菌溶液。主要由氯化钠、磷酸盐、防腐剂等组成,经过滤除菌。" Denhardt's溶液(50×) "货号:NH0008 规格:50ml 储存条件:—20℃,12个月 用途:RNA杂交、单拷贝序列的DNA杂交、DNA固定在尼龙膜上的杂交 注意事项:无菌溶液。主要由Ficoll400、PVP、BSA等组成,有刺激性气味,过滤除菌。" Mallory PTAH染色液(化学氧化法) "货号:DC0003 规格:100ml 储存条件:室温,避光,3个月 用途:肌纤维、纤维素的染色,尤其适用于横纹肌/平滑肌染色 注意事项:染色液采用化学氧化法使其成熟,但保存时间短,染色力同自然氧化法。横纹肌的横纹、纤维素、胞核、红细胞、神经胶质纤维呈深蓝色,胶原纤维、软骨呈棕红色。" 三磷酸腺苷溶液(ATP,10mmol/L) "货号:NP0053 规格:10ml 储存条件:—20℃,12个月 用途:又称腺苷三磷酸,ATP是细胞内一种高能磷酸化合物三磷酸 注意事项:主要由ATP、Tris-HCl等组成。" 葡萄糖溶液(20%,无菌) "货号:R00602 规格:100ml 储存条件:4℃,6个月 用途: 注意事项:" SDS溶液(20%) "货号:R00174 规格:100ml 储存条件:室温,6个月 用途:去污剂,变性剂,裂解细胞 注意事项:加热溶解后调pH值,当温度过低时易形成白色沉淀,加热溶解后即可使用。" 标准蛋白质溶液(BSA,10mg/ml) "货号:OR0016 规格:1ml 储存条件:—20℃,12个月 用途:蛋白浓度测定时的蛋白标准,全称Albumin bovine Solution 注意事项:主要由高纯度BSA(组分五)、超纯无菌去离子水组成。" Luxol Fast Blue染色液 "货号:DK0008 规格:50ml 储存条件:室温,避光,12个月 用途:又称监牢蓝髓鞘染色,石蜡切片 注意事项:分化步骤很重要,染色结果为:髓鞘呈蓝绿色,细胞核呈红色。" DMDC玻片硅化剂(2%) "货号:IH0002 规格:100ml 储存条件:室温,6个月 用途:玻片的硅化,包括盖玻片和载玻片 注意事项:主要由二甲二氯硅烷(DMDC)组成。" Tris缓冲盐溶液(10×TBS,pH8.0) "货号:PW0014 规格:500ml 储存条件:4℃,6个月 用途:常规PH缓冲液,常用于清洗western blot 中蛋白印迹膜,或者作为封闭液的主要成分。 注意事项:主要由TRIS-HCL(PH8.0)200mmol/L 、氯化钠、9%或1.5mol/L组成。" PBS磷酸盐缓冲液(0.01mol/L,pH7.2-7.4) "货号:IH0142 规格:500ml 储存条件:室温,12个月 用途:多用于免疫组化和细胞染色 注意事项:生物学和医学上经常用的一种磷酸缓冲液,主要由磷酸氢二钠和磷酸二氢钾组成。溶于水后PH约为7.2-7.4。" 黏蛋白异染染色液(天青A法) "货号:DG0062 规格:100ml 储存条件:4℃,避光,6个月 用途:黏蛋白染色 注意事项:酸性黏蛋白和蛋白多糖呈紫色至红色,背景呈蓝色。

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