洗涤是否决定ELISA试剂盒实验的成败

在ELISA操作中，洗涤是最主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。虽然对强阳性标本影响不是很大，但对于临界阳性阴性（灰区）标本影响较大，所以不提倡不同系列项目洗液混用。

1.某一项目的洗液建议使用该试剂盒内的洗液；
2.同一elisa试剂盒洗液用完了，建议采用同一批号的洗液；
3.同一批号的洗液也用完了，建议采用同一项目的试剂洗液；
4.同一项目的洗液用完了，建议使用该项目其他厂家的洗液；
5.同一项目所有厂家都用完了，建议采用同一系列项目的洗液（比如甲乙丙丁戊庚肝抗体检测，属于肝炎系列，急用时可以暂时混用）；
6.不建议国产洗液与进口洗液混用，也更不建议不同系列项目的洗液混用，这两点都是因为洗液的配置成分不同，特别是不同项目的洗液（正规试剂厂家），主要组分都不太一样。

洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。

ELISA试剂盒洗涤方式
（1）浸泡式
a.吸干或甩干孔内反应液；
b.用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去）；
c.浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1-2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；
d.吸干孔内液体。吸干应彻底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；
e.重复操作c和d，洗涤3-4次（或按说明规定）。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。

微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合，从而削弱蛋白质与固相载体的结合，并借助于亲水基团和水分子的结合作用，使蛋白质回复到水溶液状态，从而脱离固相载体。洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温20，其浓度可在0.05%-0.2%之间，高于0.2%时，可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。

（2）流水冲洗式
流水冲洗法最初用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗，持续冲洗2分钟后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡2分钟，吸干即可。浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，其洗涤效果更为彻底，且也简便、快速。已有实验表明，流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳