ELISA试剂盒应是靠洗涤来达到分离

     ①严格按照试剂说明操作。操作前将试剂在室温下平衡30～60 min。②加样后及时放入孵箱。标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。③封板温育时，各孔一定要封严，防止阳性标本的液体蒸发，ELISA试剂盒产生周边现象从而导致“盎”灞的出现。④用洗板机洗板时，保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；还要防止针口有纤维蛋白或异物，这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象。⑤合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。⑥加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。⑦显色剂尽量在临用前配制，不使用过期显色剂，肉眼可见浅蓝的TM显色剂不用。⑧加样时保持显色剂不外流；A、B液应避免接触金属器械。加终止液时要避免产生气泡。⑨应保证酶标板清洁，整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸。以上的措施可以得到更准确、更可靠的实验结果。加样吸嘴的洁净与否和吸量的准确性直接影响检测结果。由于吸嘴构造特殊，导致清洗困难，加大了交叉污染的机会。建议用一次性吸嘴。加样器也要经常清洗，定期校准。加样时应将所加物加在ELISA试剂盒板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出。 

     在建立ELISA试剂盒方法时做反应动力学研究。实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1～2 h，产物的生成可达顶峰。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔。反应板孔、反应板不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。温育的温度和时间应严格按规定控制，特别要注意边缘位置。96孔酶标板结构特别，易产生边缘效应，抗原抗体结合及酶促反应对温度有严格要求，酶标板周边孔与内部孔升降温速率不同，造成周边与内部孔结果差异；干浴与水浴存在明显的差异，尽可能使用水浴，并要求固相板放入水中，减少受热不均，贴密封膜，防止污物浸入。 

但却决定着实验的成败的和结合的酶标记物的目的。

     通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固体相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA试剂盒操作中，洗涤是最主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎随意。