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斑马鱼20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

2016-09-05 11:02

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本试剂盒仅供研究使用。 检测范围: 96T 0.1 ng/ml -4.0 ng/ml 使用目的: 本试剂盒用于测定斑马鱼血清、血浆及相关液体样本中20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE)的含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中斑马鱼20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE)水平。用纯化的斑马鱼20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE),再与HRP标记的20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中斑马鱼20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE)浓度。 注意事项 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9.本试剂不同批号组分不得混用。

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大鼠胰岛素样生长因子试剂盒样本处理及要求: 1. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融. 2. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 3. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 4. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。 5. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 6. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 7. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

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