多肽合成中特殊昂贵氨基酸使用的福音——Single-Shot技术

介绍 Single-Shot^TM

特殊修饰的氨基酸、非天然氨基酸在各种肽合成应用中发挥着重要作用。然而，这些修饰后的单体通常价格昂贵，其应用则受到成本的限制。为解决这一挑战。PurePep Chorus多肽合成仪引入了Single-Shot^TM功能,这一功能也是PTI公司的专利研发技术，以确保更有效地利用昂贵的单体。Single-Shot^TM功能设计使得在特定的偶联步骤中可以将氨基酸瓶中的特殊氨基酸一次性全部传递到指定的反应容器中，没有溶剂的损失，最大化的提高试剂利用率。相比之下，其他自动化多肽合成仪在液体传输过程中总会有一定量的试剂浪费，这一点对于使用特殊氨基酸和昂贵试剂来说是非常不友好的。在本实验中，Single-Shot^TM功能被用于合成以下磷酸肽：(1) 牛αS1-酪蛋白(70-79)：H-EIVPNSVEQK-NH2 和 (2) SIN1s315CP：H-CRRKGSQKVS-NH2。每个序列中的磷酸化丝氨酸如图所示。

图 1 磷酸化肽的结构

方法  Single-Shot^TM

肽合成：使用PurePep Chorus多肽合成仪在40 μmol的规模上，采用Rink-amide-MBHA树脂（0.47 mmol/g）。脱保护步骤中，使用20%哌啶二甲酰胺（DMF）溶液，每次15分钟，共进行2次。偶联反应使用200 mM氨基酸，AA与HCTU和NMM的比例为1:1:2，每次45分钟，所有偶联反应均适用，除了磷酸丝氨酸，它的偶联时间为1小时，进行两次。在线裂解：使用95:2:2:1 TFA/EDT/anisole/water溶液进行裂解，持续2小时。每个序列中，200mM磷酸丝氨酸1mL储存在Single-Shot容器中。

分析：多肽在Varian Pro-Star HPLC上，使用Varian Microsorb C-18柱（4.5 x 50 mm）进行分析，采用水-乙腈-0.1% TFA缓冲体系，在60分钟内从5%到95%的乙腈梯度逐渐增加。检测波长为214 nm。

结果  Single-Shot^TM

结果显示在图2和图3中。

图 2 H-EIVPNpSVEQK-NH2的HPLC结果

图 3 H-CRRKGpSQKVS-NH2的HPLC结果

结论  Single-Shot^TM

PurePep Chorus多肽合成仪能够生产高质量的粗品磷酸肽，同时避免了昂贵的磷酸化氨基酸的浪费。

PurePep Chorus全自动高通量多肽合成仪

• 自动多肽纯化

• 可配置2、4或6个反应容器

• 选配可控感应加热和振荡混匀

• 选配实时紫外线监测

• 内置PurePep Pathway流路系统

• Single-Shot^TM液体传输技术

• 直观的操作软件

• 自动原位切肽