Western Blot技术篇---样品制备

公共卫生突发事件中，对人类威胁最大，可引起大规模恐慌的是传染病引起的突发事件（例如，新冠、SARS、埃博拉、禽流感等等）。传染病以其突发性和传播性的基本特点，需要公共卫生系统做出快速响应。本次新型冠状病毒大流行对全球各个国家的公共卫生防治系统发起挑战。 后疫情时代，对更加快速、高通量、自动化、减少研究人员暴露的蛋白质检测分析平台的需求更加前所未有。国家及地方相关部门，需对由病原微生物，包括病毒、细菌和寄生虫引起的传染病入侵机制，对病原体快速鉴定，利用高敏感性和特异性方法阐明分子机制，信号通路，疫苗研发、药物等抗感染手段等。

美国加利福尼亚大学伯克利分校的科学家，利用单细胞Western技术在期刊SCIENCE ADVANCES（IF：12.804）发表文章：Assessing heterogeneity among single embryos and single blastomeres using open microfluidic design, Sci. Adv. 2020; 6: eaay1751 22 April 2020. 本文利用单细胞Western技术与现有的工作流程整合在一起，为评估植入前胚胎发育固有的细胞间分子异质性开辟了新途径。

在AAV生产过程中，使用SDS-PAGE通过Western Blot来鉴定蛋白。然而，传统的Western Blot手动操作繁琐，重复性差，并且仅是半定量，不宜用于工业产品质量控制。Wes全自动定量western以其独特优势逐渐替换传统western blot，可用于新型AAV衣壳的表达到下游制造全程质量控制中。与所有治疗药物一样，基因疗法，需要表征包装药物的递送载体电荷等。使用全柱成像毛细管等电聚焦电泳法（icIEF）来表征AAV的电荷异质性，可以确保产品的稳定性和一致性。Maurice兼具CE-SDS和iCIEF双功能。

疫苗根据工艺分为减毒疫苗，灭活疫苗，亚单位疫苗，基因工程疫苗，涉及一系方法进行质量控制，其中等电点及电荷变异体对于鉴别和工艺稳定性至关重要。本文涉及病毒，重组疫苗，mRNA疫苗，病毒样颗粒（VLP)等不同类别疫苗的等电点及电荷异质性检测。