《化妆品安全技术规范（2015年版）》修订新增——吡硫翁锌等19种组分分析

《化妆品安全技术规范（2015年版）》修订新增——吡硫翁锌等19种组分分析

吡硫翁锌等19种组分检测方法为2015版《化妆品安全技术规范》中新添加的防腐剂检测方法（4.2），该项目将自2021年5月1日起正式开始实施。

本项目的19种组分包括吡硫鎓锌、水杨酸、山梨酸、苯氧异丙醇、2,6-二氯苯甲醇、苯甲酸甲酯、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、对氯间甲酚、2,4-二氯苯甲醇、邻苯基苯酚、邻伞花烃-5-醇、氯二甲酚、氯咪巴唑、苄氯酚、吡罗克酮乙醇胺盐、三氯卡班、三氯生、溴氯芬、硫柳汞钠。

其中前18种共同分析，硫柳汞钠单独分析。

标准品的分析

我们按照2015版《化妆品安全技术规范》4.2项下方法，对吡硫翁锌等18种化合物混标进行了分析，结果如下面谱图所示，我们得到了与标准谱图较为类似结果，出峰顺序和结果如下：

280nm

230nm

对硫柳汞钠分析结果如下面谱图所示，硫柳汞峰能够与前后的2,6-二氯苯甲醇和苯甲酸甲酯分离。 

另外，本次分析中，为了保证分析不受流动相来源鬼峰的影响，并且能获得更加平稳的基线，我们在进样器前加装了大曹三耀Ghost Cleaner I鬼峰柱。

检测方法和结果谱图如下面所示：

检测方法：

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6mm i.d.×250mm Ghost Cleaner I; 4.6mm i.d.×50mm

仪器：岛津20AD（二元泵体系）

流动相：

A: 磷酸二氢钠溶液（pH=3.80）：称取磷酸二氢钠3.9 g，乙二胺四乙酸二钠0.186 g，于500 mL烧杯中，加水溶解，移至1000 mL容量瓶中，准确量取三乙胺2 mL，至同一1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，即得磷酸二氢钠溶液（含0.5 mmol/L EDTA-2Na）。用磷酸调节pH至3.80。 

B: 甲醇

梯度条件如下：

流速：1.0 mL / min

温度：30°C

检测：PDA 230、280nm

浓度：

进样量：10 µL

实际样品的分析

我们对化妆水和乳液两种样品，按照技术规范方法进行前处理后进样，得到结果如下面谱图所示。由于化妆水中的峰A与山梨酸峰，乳液样品中峰B与对氯间甲酚峰保留时间比较接近，我们也对光谱图进行了比较，二者均不一致。但为获得确切信息，仍建议进行质谱验证。

结果谱图：

*18种样品前处理方法：准确称取样品1.0 g，精确至0.001 g，置于50 mL具塞比色管中，加入甲醇8 mL，涡旋振荡30 s，使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20 min，用甲醇定容至10 mL，摇匀，以10000 r/min离心5 min。取上清液经0.22 um滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。

吡硫鎓锌前处理方法：准确称取样品0.5 g，精确至0.001 g，置于50 mL具塞比色管中，加入乙腈+甲醇（95+5）40 mL，涡旋振荡30 s，使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20 min，用乙腈+甲醇（95+5）定容至50 mL，摇匀，以10000 r/min离心5 min。取上清液经0.22 um滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。

分析注意事项

1. 色谱柱的选择

我们尝试使用了聚合物包被型C18 MGII色谱柱和常规封尾ODS色谱柱进行了18种混标的分析对比，结果如下图所示，可明显看到峰1（吡硫翁锌）和峰15（吡罗克酮乙醇胺）在峰面积及峰型上有较大差别，这两个物质结构上均为易螯合吸附在色谱柱上的物质，因此建议选择硅醇基及残留金属离子少的色谱柱（如使用聚合物包膜技术减少死吸附的CAPCELL PAK C18 MGII），以得到更好分析结果。

同时，建议在使用全新色谱柱进行分析时，先进样高浓度单标（吡硫翁锌、吡罗克酮乙醇胺、硫柳汞钠）平衡可能的吸附位点，以得到更稳定的峰面积结果。

2. 柱温的选择

由于在柱温30℃条件下，峰11和12未能得到基线分离，因此我们也尝试对柱温进行了调整。在调整中发现，柱温越低，有利于峰11和12的分离，在25℃柱温下，可得到1.6分离度的结果，但低温不利于峰16和17的分离，此时二者分离度下降至0.8，对比结果下图所示。

3. 梯度条件的调整

我们尝试对梯度进行了调整，但梯度调整对峰11和12、峰16和17间的分离度没有明显改善。此外，由于保留时间54min后没有其他物质峰，因此我们去掉了原标准中55min下降至45%后再下降至20%的过程，而变化为直接下降到20%进行了8min后平衡。

分析总结

综上所述，使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱能够按照2015版《化妆品安全技术规范》中新添加防腐剂检测方法（4.2）吡硫翁锌等19种组分检测方法进行分析。

下图为技术规范参考谱图：