草鱼中4种硝基呋喃代谢物检测

前言

硝基呋喃类药物（NFs）是一类广谱抗生素。由于会引发健康问题，大部分监管机构都已禁止对食用动物施用硝基呋喃类药物，由于其产量大、销售范围广，因此存在滥用的风险。

硝基呋喃类药物母体仅存在于畜牧生产和水产养殖过程使用的加药饲料中。硝基呋喃类药物母体会在动物体内迅速耗尽并大范围代谢为组织结合代谢物。目前已有针对多种动物组织(例如肾脏)的官方质控方法，以及针对肌肉、蜂蜜、虾、鸡蛋和牛奶的消费者风险评估方法。

本文参考GB 31656.13-2021《食品安全国家标准 水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定 液相色谱-串联质谱法》标准，使用液相色谱-串联质谱仪对草鱼中的4种硝基呋喃代谢物进行分析，通过检出限、定量限、精密度、准确度等指标评估质谱仪（禾信LC-TQ 5200）性能，证明禾信LC-TQ 5200满足水产品中4种硝基呋喃代谢物检测的需求。

实验部分

样品前处理

草鱼鱼糜状样品：称取2.0 g试样，置于50 mL具塞离心管中，加入适量的4种硝基呋喃代谢物氘代内标混合标准工作溶液，充分混匀后，加入5.0 mL 0.5 mol/L盐酸溶液和150 μL 0.05 mol/L二硝基苯甲醛衍生溶液，涡旋振荡1 min，置于37℃恒温烘箱进行15 h衍生化反应，取出冷却至室温，加入3.5 mL 1.0 mol/L磷酸氢二钾溶液，调节PH值为7.5左右，加入10 mL乙酸乙酯，涡旋振荡10 min，10000 r/min离心5 min，转移上清液于玻璃试管中，40℃下氮吹近干，用1.0 mL 5%甲醇水溶液复溶，加入1.0 mL正己烷，取下层上清液用0.22 μm有机滤膜过滤，供仪器分析。

仪器条件

表1. 仪器方法参数

结果与讨论

1、标准谱图和物质信息

4种硝基呋喃代谢物总离子流图和MRM色谱图见图1，目标化合物的浓度为1.25 μg/kg，各目标化合物和内标出峰顺序、保留时间以及特征离子信息见表2。

表2. 化合物的保留时间和特征离子信息表

2、标准曲线

称取空白样品若干份，添加含有4种硝基呋喃代谢物的混合标准工作溶液和4种硝基呋喃代谢物氘代内标的混合标准工作溶液，经过前处理衍生反应，得到草鱼中目标物的质量浓度分别为0.05 μg/kg、0.125 μg/kg、0.25 μg/kg、0.50 μg/kg、1.25 μg/kg、2.50 μg/kg、5.00 μg/kg、12.5 μg/kg的系列浓度样品，对4种硝基呋喃代谢物的混合标准曲线溶液进行分析。4种目标物的线性相关系数R2均大于0.999，详见图3，均符合标准要求。

图3  4种硝基呋喃代谢物标准曲线图

3、样品加标回收实验

对草鱼样品进行加标浓度分别为0.25 μg/kg、0.50 μg/kg、1.25 μg/kg、2.50 μg/kg的加标实验，每个浓度平行实验6次，对精密度和准确度进行评估，4种目标物的相对标准偏差（RSD）在1.0%~7.0%范围，实验结果优于标准的精密度要求。

表3. 目标物草鱼样品加标精密度

3.1 准确度

样品加标浓度在0.25 μg/kg~2.50 μg/kg时，4种目标物的回收率在94.8%~114.6%范围，实验结果符合标准的回收率要求。

表4. 目标物草鱼样品加标平均回收率

3.2 最低定量限

方法GB 31656.13-2021提供了方法学验证中的最低定量限，通过草鱼样品加标实验分析，本方法中4种目标物的方法最低定量限均为0.05 μg/kg，低于标准要求的最低定量限（1.0 μg/kg），体现了禾信LC-TQ 5200具有优异的灵敏度，满足水产品中4种硝基呋喃代谢物的检测要求。