分析动物性食品中雌激素类残留量

前言

17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮均为雌激素类，常在动物性食品中添加使用。畜禽食用含有激素的饲料后，这些激素会沉积在畜禽的肉和内脏中，人食用含有大量激素的畜禽产品后，常常会出现心动过速、心慌、手颤、头晕、头痛等神经中枢调节紊乱的现象，尤其对高血压、心脏病、糖尿病、甲状腺功能亢进、前列腺肥大患者危险性更大。同时影响生殖系统，导致性发育提前，食用激素含量高的畜禽产品可使体内雌激素增高，可能致使男性乳房女性化发育。一些激素还易引起性发育提前和各种肿瘤，如卵巢肿瘤、肾脏腺肿瘤等。

本文参考GB 31658.7-2021《食品安全国家标准 动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残留量的测定 气相色谱-质谱法》，使用气相色谱-质谱联用仪检测猪肉中的17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残留量，通过检出限、精密度和准确度等指标评估仪器性能，证明GCMS 1000满足检测的需要。

实验部分

样品前处理

取试样5 g于50 mL离心管，加醋酸钠缓冲液10 mL，均质1 min，涡旋振荡2 min,加葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶20 uL，50℃酶解2 h，加乙酸乙酯20 mL，涡旋振荡3 min，10000 r/min离心5 min，收集上清液于100 mL鸡心瓶中，残渣中加乙酸乙酯20 mL，重复提取1次，合并上清液，40 ℃平行浓缩仪蒸发至近干，用氢氧化钠溶液6 mL分3次溶解洗涤鸡心瓶，洗液转入50 mL离心管中，加正己烷20 mL，涡旋振荡1 min，10000 r/min离心5 min，收集下层清液，加醋酸铵溶液1mL，用冰醋酸调pH至5.0~5.2，备用。取C18固相萃取柱，依次用甲醇、水各5mL活化。取备用液，过柱，分别用水、甲醇水溶液各5 mL淋洗，抽干，加甲醇5 mL洗脱，收集洗脱液，50 ℃水浴氮气吹干。加乙酸乙酯正己烷溶液5 mL使溶解，备用；取硅胶固相萃取柱，加正己烷5 mL活化，取备用液过柱，淋洗，抽干，加乙腈5 mL，洗脱，收集洗脱液，50℃水浴氮气吹干。加入甲苯、衍生化试剂各100 μL于吹干玻璃管中，混合均匀，封口于80 ℃烘箱衍生60 min，冷却后加入300 μL甲苯，混匀，供GCMS测定。

仪器条件

表1.仪器方法参数

结果与讨论

1、标准谱图和物质信息

实验总离子流图见图1，17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮加标浓度均为1000 μg/L。17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮出峰顺序、保留时间以及特征离子信息见表2。

图1 17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮衍生物总离子流图

表2. 17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮保留时间和特征离子信息表

2、标准曲线

取17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮适量，用甲醇稀释成浓度分别为10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L、1000 μg/L系列标准溶液，各量取500 μL加入氮吹玻璃试管中，50 ℃水浴氮气吹干，在吹干玻璃管中加入甲苯、衍生化试剂各100 μL，震荡混合，于80 ℃烘箱衍生60 min冷却后加入300 μL甲苯混匀后进行分析。17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮的线性相关系数R2均大于0.990。

图2 17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮标准曲线图

3、加标回收实验

3.1 精密度和准确度

分别对5 g猪肉进行加标实验，最终定容后加标浓度为10 μg/L、100 μg/L、500 μg/L，各六次平行实验，对精密度和准确度进行评估，准确度具体信息详见下表3。目标物浓度为10 μg/L的目标物的相对标准偏差（RSD）在8.5%-14.6%范围内，17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮浓度为100 μg/L和500 μg/L时，RSD分别在7.1%-8.9%和1.1%-1.8%范围内；回收率分别为61.2%-90.8%、60.7%-75.9%、65.3%-106.8%。

表3.猪肉加标回收率

3.2 检出限

方法GB31658.7-2021《食品安全国家标准 动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残留量的测定 气相色谱-质谱法》建议对5 g猪肉进行前处理，并最终定容至0.5 mL。测定平行加标样品7次，计算标准偏差（SD），根据方法检出限MDL=t（n-1，0.99）×SD计算各目标化合物的方法检出限。结果如下表4所示，计算可知，17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮方法检出限范围为0.2 μg/L-0.3 μg/L。

表4. 17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮方法检出限

结论

本文依据GB31658.7-2021《食品安全国家标准 动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残留量的测定 气相色谱-质谱法》，采用禾信GCMS 1000分析了猪肉基质中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残。结果显示：17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残的线性相关系数R2均大于0.990；RSD在1.1%-14.6%范围，优于标准要求的RSD≤15%；猪肉中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残的加标回收率在60.7%-106.8%范围，满足标准要求回收率（60%-110%）；方法检出限在0.2 μg/kg-0.3 μg/kg范围，满足标准要求的检出限0.5 μg/kg。上述结果表明禾信GCMS 1000具有优异的重现性和检测灵敏度。

参考文献

1. GB31658.7-2021《食品安全国家标准 动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残留量的测定 气相色谱-质谱法