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乙脑病毒鼠源单链抗体的构建及表达

2012/09/19 13:26

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2012/09/19

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方案摘要：

获得乙脑病毒（JEV）鼠源单链抗体基因（ScFv）并使其在E.coli中表达。方法　利用噬菌体表面呈现技术，从抗乙脑病毒杂交瘤细胞2H4中构建噬菌体抗体库，采用双抗体夹心模式对抗体库进行富集及检测。并将所获得的阳性克隆基因插入GST融合表达载体中，构建融合表达克隆，使其在E.coli中获得稳定表达产物。结果　所构建的噬菌体抗体库经3轮的吸附、洗脱及再感染的富集过程后，共检测到7株稳定的具有乙脑抗原结合活性的阳性克隆，对其中的mu2H4-3和mu2H4-36进行了序列测定。经分析，2个克隆的基因序列一致，其重链及轻链分别属于Kabat鼠抗体基因家族中第Ⅰ及κ第Ⅵ亚群。构建为融合表达载体pG51-mu2H4后，此单链抗体mu2H4在E.coli BL21中获得表达，产量约为菌体蛋白的10%。结论　从抗乙脑病毒杂交瘤细胞中克隆并表达了特异单链抗体片段mu2H4，为下一步的人源化改造提供了资料。

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