爱尔兰Megazyme公司膳食纤维总量检测试剂盒

适用于方法 AOAC 991.43/ AACC 32-07/ AACC 32-21/ AOAC 985.29/ AACC 32-05
前言
膳食纤维是复杂有机物的混合物，包括亲水化合物例如可溶或不可溶的多糖和不能被消化的低聚糖以及一些不可膨胀的，或多或少疏水的化合物例如角质素，软木脂，木质素。总膳食纤维的测定方法是以AOAC法991.43，AOAC法985.29，AACC法32-07和AACC法32-05。但Megazyme总膳食纤维检测试剂盒里的酶也可以用于其他膳食纤维检测如AACC法32-21和AACC法32-06。
原理（总膳食纤维）
总膳食纤维是采用经过干燥和脱脂（如果脂肪含量>10%）的复样为样品。样品用热稳定的α-淀粉酶在100℃下处理以使淀粉成胶状，水解和解聚；用蛋白酶（使蛋白溶解和解聚）和淀粉葡糖甘酶（将淀粉碎片水解成葡萄糖（来自淀粉））在60℃下处理；然后用4倍体积的乙醇处理以沉淀可溶性纤维，去除解聚的蛋白和葡萄糖（来自淀粉）。然后残留物分别用78%乙醇，95%乙醇，丙酮洗涤，再干燥，称重。一份复样用于蛋白分析，另外一份在525℃下孵育以测定灰分，总TDF就是被过滤和干燥的残留物的重量减去蛋白和灰分的重量。
Megazyme总膳食纤维检测试剂盒的最大优势就是使用的酶为高纯度酶，酶之间没有干扰效应的，且具有标准化酶活力。Megazyme 淀粉葡糖甘酶完全没有纤维素酶的活性，但其他公司生产的酶常被此活性污染，那样会导致β-葡聚糖被溶解和含量经常被低估。所有的Megazyme酶都是液态即用型。
范围
应用于谷粒，果蔬，谷物和水果型产品食品。
酶纯度和标准化
Megazymeα-淀粉酶，蛋白酶，淀粉葡糖甘酶已经使用AOAC 985.29，AOAC 991.43和 AACC 32-05推荐的标准评价过。Megazymeα-淀粉酶（E-BLAAM）的酶活为3，000UmL(Ceralpha 法)；蛋白酶的浓度为50mg/mL(~350 酪氨酸U/mL)；淀粉葡糖甘酶单位为200U/mL（底物为对硝基苯基β-麦芽糖苷）或单位3300U/ mL（底物为可溶性淀粉），淀粉葡糖甘酶酶活为传统TDF分析使用的150%。
Megazyme淀粉葡糖甘酶（E-AMGDF）完全没有纤维素酶的活性，但其他公司生产的酶常被此活性污染，纤维素酶污染高达1%（在酶活的基础上），这个水平的污染常会导致β-葡聚糖含量经常被低估10%-15%。
TDF检测试剂盒
瓶子1：耐热α-淀粉酶（20 mL，~3，000U/mL,(Ceralpha 法)）~10,000U/mL (底物为可溶性淀粉)（Megazyme 编号E-BLAAM）。
瓶子2：纯化的蛋白酶（20 mL，50mg/mL；~）~350 酪氨酸U/mL，（Megazyme 编号E-BSPRT）。
瓶子3：×2 纯化的淀粉葡糖甘酶（20 mL，3300U/ mL（底物为可溶性淀粉））（Megazyme 编号E-AMGDF）
实验所需的Celite®545，100g或500g包装的硅藻土试剂盒不提供，需单独购买（编号G-CEL100，或G-CEL500）。

酶及酶法试剂盒
爱尔兰Megazyme公司是全球知名的酶及酶法分析试剂盒的生产厂家，其中大多数产品都被AOAC(Association of Official Analytical Chemists)、AACC(American Association of Cereal Chemists)、ICC(International Association for Cereal Science and Technology)、 EBC(European Brewing Convention)、RACI(Royal Australian Chemical Institute)等国际组织采用。其中欧洲检测果汁及葡萄酒等发酵产品基本都采用该公司产 品。

其中全线产品及相关检测信息见：2009Megazyme产品目录.PDF。

该公司产品分以下系列：


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1. 生物及食品酶法分析试剂盒 (Diagnostic Kits)
2. 试剂混合物(Reagent Mixtures)
3. 协同因子(Cofactors)
4. 糖酶片剂试验(Carbohydrase Tablet Tests)
5. 蛋白酶片剂试验(Protease Test Tablets)
6. 可溶性呈色底物(Soluble Chromogenic Substrates)
7. 不可溶性（交联的）呈色底物(Insoluble (Crosslinked) Chromogenic Substrates)
8. 酶(Enzymes)
9. 植物凝血素(Lectins)
10. 多聚糖(Polysaccharides)
11. 低聚糖(Oligosaccharides)
12. 相关产品 (General)


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其中产品被国际机构采用，建立国际检测方法如下：


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总淀粉检测盒（Total Starch Assay Kit）
• AOAC Method 996.11
• AACC Method 76-13
• ICC Standard Method no. 168
• RACI Standard Method
总膳食纤维检测盒（Total Dietary Fibre Assay Kit）
• AOAC Method 985.29
• AOAC Method 991.42
• AOAC Method 993.19
• AOAC Method 991.43
• AACC Method 32.07
• AACC Method 32.21
• AACC Method 32.05
淀粉损失检测盒（Starch Damage Assay Kit）
• AACC Method 76-31
• ICC Standard No. 164
• RACI Standard Method
α-淀粉酶检测盒Ceralpha (α-Amylase) Assay Kit
• AOAC Method 2002.01
• ICC Standard No. 303
• RACI Standard Method
• CCFRA Flour Testing Working Group Method 0018
• AACC - under evaluation.
Alpha淀粉酶检测盒Amylazyme (α-Amylase Assay)
• AACC Method 22.05
• RACI Standard Method
果聚糖检测盒Fructan Assay Kit
• AOAC Method 999.03
• AACC Method 32-32
木聚糖酶AX片剂（Xylazyme AX Tablets）
• Xylazyme AX Tablets have been widely adopted in the fermentation and feeds industries for the measurement of Xylanase.
β-葡聚糖检测盒β-Glucan (Mixed Linkage) Assay Kit
• AACC Method 32-23
• EBC Methods 3.11.1, 4.16.1 and 8.11.1
• AOAC Method 995.16
• ICC Standard No. 166
• RACI Standard Method
极限糊精酶和支链淀粉酶检测片剂（Limit-Dextrizyme）
• RACI Standard Method
β-葡聚糖酶检测盒（β-Glucanase (Malt and Microbial) Assay Kit）
• RACI Standard Method
β-淀粉酶检测盒（Betamyl (β-Amylase Assay Kit)）
• RACI Standard Method.
木聚糖酶检测底物（Azo-Wheat Arabinoxylan ）
• Azo-Wheat Arabinoxylan, Azo-CM-Cellulose and Ceralpha methods for the assay of Xylanase, cellulase and ?-Amylase, respectively, have been adopted by the UK silage industry.
抗性淀粉检测盒（Resistant Starch Assay Kit）
• AOAC Method 2002.02