目的介绍四倍体胚胎补偿法制备ES小鼠技术的操作环节,加快该技术的推广应用。方法综合分析近几年来国内外在小鼠四倍体胚胎与ES细胞嵌合的研究成果,

荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的今天，也许对你来说，最难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种荧光定量PCR仪——你要征询实验室成员的意见、分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算，更要详细研究各种极富诱惑力的宣传资料。面对各种不同性能的产品，您又该如何选择呢？ 　　

不需显微操作体细胞核移植的利益和前景远大。当前的成果包括降低装备费用，简化预备工作及实验技术要求低。任何做过胚胎方面试验和口吸管方面工作的人都能很快掌握。尽管用卵母细胞试验的直接工作没有显著减少，但降低了这些工作的技术难度。此外，与早期的技术相比，预备工作如制作工具可以省略。然而，应该注意到产生三倍体需要较多的卵母细胞。无透明带的胚胎可能有利于嵌合体的制作，克隆方法的简化也将有利于核移植的自动化。在卵母细胞成熟期间，用于建立该方法的供 体细胞是贴壁的原代培养的颗粒细胞，这些细胞并不是都很适合做供体。随着方法的进一步改进，可能能用不同器官组织的传代细胞和血清饥饿培养的细胞。

The Pump 11 Elite Glucose Clamp Infusion System is a time saving syringe pump enhancement that offers quick and simple set-up using our innovative touch screen display. The built-in software capabilities reduce the potential for error in your research by providing the most accurate fluid delivery available.

Instech’s clear animal enclosures are ideal for tethered rodents, as they have no sharp corners where the tether can catch or tangle. Originally designed for short-term microdialysis experiments, the tanks can be ordered pre-machined to accommodate feeders and water bottles in order to house animals for longer periods. The floor areas of the two models exceed USDA regulations and NRC guidelines for the largest singly-housed rats and mice.1 The feeders and water bottles mount outside the tank to avoid interference with the tether. The feeder pellet opening is approximately 13x20mm. Use the 6-inch MCLA lever arm with the larger rat tank and the 3.5-inch SMCLA arm with the small mouse tank

Lack of TCF2vHNF1 in mice leads to pancreas agenesis C. Haumaitre*, E. Barbacci*, M. Jenny?, M. O. Ott*, G. Gradwohl?,and S. Cereghini*? *Biologie du De′ veloppement, Unite′ Mixte de Recherche 7622,Centre National de la Recherche Scientifique, Universite′ Pierre etMarie Curie, 9 Quai St. Bernard Ba t C, 75005 Paris, France; and ?Institut National de laSante′ et de la Recherche Me′ dicale U381, 3 Avenue Molie` re,67200 Strasbourg, France Edited by Kathryn V. Anderson, Sloan–Kettering Institute, New York,NY, and approved December 20, 2004 (received for review August 6,2004) Heterozygous mutations in the human POU-homeobox TCF2

生酮饮食对大鼠代谢的影响 摘要：【摘要】 目的 了解生酮饮食对大鼠代谢的影响，为生酮饮食作用机制的相关研究提供参考。 方法将16只雄性Wistar大鼠按单纯随机抽样法分为干预组和对照组，应用配对喂养原则，根据对照组前24h内进食量，给予干预组相等能量的生酮饲料，并在干预前和干预后第3天和第15天，测定大鼠的静息代谢率。干预组和对照组，应用配对喂养原则，根据对照组前24h内进食量，给予干预组相等能量的生酮饲料，并在干预前和干预后第3天和第15天，测定大鼠的静息代谢率。结果生酮饲料喂养的正常大鼠能量主要来源为脂肪，体重增长落后于对照组（P<0.05）;在干预2周后，生酮饲料喂养的正常大鼠夜间代谢率低于对照组（P<0.05）。

物手术经常会用到一些器械，下面就给大家介绍一下常用的动物手术器械都有哪些？希望能让大多数人懂的更多。 粗剪刀(scissors) 用来剪去动物的毛发，剪开皮肤以及蛙头、脊柱、骨骼等粗硬组织。 尖头手术剪刀（surgical scissors） 又称为线剪，用于剪线、引流物、敷料等。 圆头手术剪刀（surgical scissors） 又称组织剪，适用于分开剥离和剪开、剪断组织。 眼科剪（ophthalmic scissors） 又称虹膜剪，有弯、直两种，用于剪开精细组织。 执剪法 以拇指和无名指分别插入剪柄的两环，中指放在无名指指环的前外方柄上，食指轻压在剪柄和剪刀片交界处的轴节处。 止血钳 直血管钳用以钳夹浅层组织出血点或协助拔针，分离皮下组织和肌肉等。 弯血管钳用以钳夹深部组织或体腔内的出血点及血管。 执法同组织剪 眼科镊(ophthalmic forceps) 尖头镊子(forceps) 圆头镊子(forceps)

自身给药模型在物质成瘾中的应用 自身给药(self—administration)模型利用操作性条件反射原理，动物在做出程序所设定的动作后，即可获得一定量的药物。由于该模型较好地模拟了人类的用药行为，故在成瘾研究中得到了广泛的应用。

方法　采用剂量递增吗啡依赖模型空白对照法及吗啡依赖动物自身对照方法，评价条件性位置偏爱实验系统。 结果　从给药d3天开始，受试动物表现出与用药相关的一侧实验箱（伴药盒）的偏好，停留时间比在另一侧箱（非伴药盒）的长(P<0.01)，停用吗啡后，对伴药盒仍有偏好。 在药物的精神依赖性评价中，条件性位置偏爱实验与自身给药和药物辨别实验方法相比，有其独特的优点：设备简单，实验周期短，动物不受操作方式运动方式的影响，也不会因受试后是否防碍运动机能而影响实验结果。条件性位置偏爱实验方法最大的优点在于不仅能够测出药物的奖赏效应，而且还能测出药物的厌恶效应。但此方法需在动物的行为观察方面花费较多时间，工作量大，并且实验数据也会有人为误差。同时，采用经典阿片类药物吗啡造成依赖动物模型，对其系统进行评价。

60年代以来，动物行为学的研究就受到各国科学家的关注。欧洲的一些动物行为学家对动物行为研究的发展作出了重大的贡献。70年代以来，随着人们对动物行为研究重要性的认识，有关的科研项目日益增多，动物行为学已成为生物学中极为活跃和重要的一个分支学科。它除了研究动物行为本身外，还把研究内容从行为维系群体的作用，扩展到行为的个体发育进化史、行为的控制及社会性组织等方面。通过这些研究，使动物行为学得到了进一步的发展，并已逐渐发展为一门不仅涉及行为学，而且涉及到生态学、生理学、心理学、遗传学、进化论、社会学和经济学的一门综合性学科。

动物行为学实验方法文献综述 1 前言 2 正文 动物行为学实验主要有学习记忆类、药物成瘾类、抗焦虑抑郁类、抗疲劳类、神经精神类、痛觉测试类共六大类。其中抗焦虑抑郁类又可作为大部分动物行为学实验的前置实验，作为每一组动物的焦虑度的一个评判。当然洞板实验测得的探索性也可以作为一组动物的生理心理指标的。 2.1 学习记忆类 2.1.2 穿梭箱 2.1.3 洞板实验 2.2 神经精神类. 2.2.1 旷场实验 2.3 抗焦虑抑郁类 2.3.1强迫游泳 2.3.2 高架0迷宫 3 总结

条件性恐惧实验 （一）条件性恐惧实验实验原理： 条件性恐惧实验系统（FCS）用于小型啮齿类动物（大、小鼠）环境相关条件性恐惧实验研究。啮齿类动物在恐惧时会表现出特有的不动状态（immobility），动物在这种情况下倾向于保持静止不动的防御姿势。抗抑郁药和抗中枢兴奋药可以明显缩短不动状态持续的时间。 在条件性恐惧实验中，实验对象被给与一个声音信号（条件刺激），随后给予电击（非条件）刺激。该训练称为条件性训练，训练结束后实验动物进行声音信号或环境联系性实验。一般情况下啮齿类动物对相应的环境和不同环境下同样的声音信号都会做出明显的条件性恐惧反应，比如静止不动。这种测试可以在训练结束后立刻或几天后进行可以提供在条件信号影响下短期和长期记忆的信息。 （二）条件性恐惧实验步骤： 现举例如下： 实验分为三个阶段： 第一阶段：条件性训练（1天） 无刺激 180s 声音信号 30s 电击 2s 无刺激 20s 第二阶段：环境相关（2天） 无刺激 180s 第二阶段将实验动物放入第一阶段中的环境中以期评价环境相关的条件性恐惧程度。 第三阶段：改变的环境相关信息（2天+2h） 无刺激 180s 声音 180s 无刺激 60s

大小鼠强迫游泳实验： 又称Porsolt’s test，此模型是最广泛用来评估抗抑郁药的行为学模型，强迫游泳实验操作简单，对抗抑郁药敏感，能够检出广谱的抗抑郁药，缺点是仅对急性治疗的药物敏感，对5-羟色胺重摄取抑制剂类的药有效性不确定，有导致动物低体温的风险，现多用于抗抑郁药的初筛。 小鼠悬尾实验： 是与强迫游泳实验相似的经典实验，悬尾小鼠为克服不正常*而挣扎活动，但活动一定时间后，出现间断性不动，显示“绝望”状态，此模型与强迫游泳实验的共同点是操作简单，对抗抑郁药敏感，测量其不动状态的适应性行为是一致的。不同点：抗抑郁药作用的底物不同，两种模型中动物脑内多种神经递质的变化及受体功能改变不一致。小鼠悬尾实验能够反映应激性低体温而强迫游泳实验不能，而小鼠悬尾实验仅适用于小鼠应激，而不适用于大鼠，目前也多用于抗抑郁药的初筛。 获得性无助模型： 获得性无助是一种更接近于疾病病因学和遗传学的动物模型。值得注意的是，大部分小鼠获得性无助模型只是短期的，在终止刺激后几天内就恢复正常，但因为某些未知原因，仅仅有部分小鼠仍然保持无助的症状，这反映了潜在的基因与环境交互作用。获得性无助模型目前不仅用于抗抑郁药的筛选，且已日益用于此类药物的作用机制及抑郁症的神经生物学的研究，与强迫游泳实验、悬尾实验相似的是，获得性无助模型不能检测出慢性抗抑郁药的药效。

在非临床有效性研究过程中，主要采用行为学试验研究药物对动物学习记忆功能的影响。人和动物的内部心理过程是无法直接观察到的，只能根据可观察到的刺激反应来推测脑内发生的过程，对脑内记忆过程的研究只能从人类或动物学习或执行某项任务后间隔一定时间，测量他们的操作成绩或反应时间来衡量这些过程的编码形式、贮存量、保持时间和它们所依赖的条件等等。学习、记忆实验方法的基础是条件反射，各种各样的方法均由此衍化出来。目前已经建立了大量的学习记忆研究的行为学方法，各有优缺点。现将常用的迷宫简述如下。 1. T迷宫实验 2. Barnes迷宫实验 3. 放射状迷宫实验 （八臂辐射迷宫） 4. Morris水迷宫实验

药物对动物学习和记忆的影响--- Morris水迷宫实验 一、目的和原理 Morris水迷宫为一直径120cm、高50cm的圆柱型水池，以池底圆心为中心将迷宫划分为四个象限，将一直径12cm、高30cm的透明圆柱型有机玻璃平台置于某一象限中心，迷宫上方安置与电脑系统相连接的摄像机，可同步记录大鼠运动轨迹及寻找平台潜伏期等，实验期间迷宫外参照物及平台位置保持不变。实验时在池壁选择四个入水点，相邻两个入水点间距离不小于25cm，向池内加自来水，用奶粉染成不透明的乳白色，水面约高于平台面2cm，水温保持在25℃左右。 二、实验材料 (三). 动物：大鼠。 (四). 器材：Morris水迷宫。 三、观察指标 逃避潜伏期、轨迹图、各象限游泳距离。 四、方法与步骤 (五). 训练 (六). 测试 五、注意事项

药物对动物学习和记忆的影响---大鼠穿梭实验 一、 目的和原理穿梭实验 此实验在大鼠穿梭箱中进行，一般大鼠穿梭箱分为安全区和电击区，中间有一高1.2cm的挡板隔开，穿梭箱底部为可通电的不锈钢棒，实验时安全区不通电，电击区通电。箱内顶部有光源或（和）一定的声音。训练时，将大鼠放入箱内如何一区，先给条件刺激如灯光或（和）一定声音，紧接着给电击（非条件刺激）。受到电击时，大鼠会逃向安全区躲避电击，这样一有条件刺激接着就发生电击，反复多次大鼠就会出现条件反射，即灯光或（和）一定声音一出现时立即逃避到安全区。经过数次训练后，大鼠可逐渐形成主动回避性条件反射，从而获得记忆。大鼠在条件刺激期间逃向安全区为主动回避反应，在电击后逃向安全区为被动回避反应。穿梭实验 东莨菪碱可抑制条件反射的形成，造成记忆获得障碍，加兰他敏可拮抗东莨菪碱的作用。穿梭实验 二、 实验材料 三、 观察指标 四、 方法与步骤 五、 注意事项

【关键词］学习记忆；Y迷宫；大鼠 国内外多采用建立条件反射的方法检测动物的行为和高级脑功能，其中Y密宫法可同时观察动物的 逃避条件反射能力和空间辨别能力，并且结构简单、价格便宜、不受气候变化的影响以及可满足一些特殊需要(如在太鼠头部埋藏电极以便测量脑电圈或引导脑诱发电位时不宜使用永迷宫)等，因而在国内得到了广泛应用例如：目前在探讨痴呆的病理发病机制和观察药物疗救方面，多以大鼠为实验对象，对其进行Y迷宫检测，根据其学习记忆能力的变化来判断建模是否成功或药物有无疗效．

在动物心理学的实验研究中，迷宫是很常用的一种仪器。文章介绍了迷宫的发展历史、类型以及应用的研究领域，并讨论了未来迷宫方法的进一步改进及其广泛的应用前景。 迷宫在实验动物心理学形成及发展中的作用至关重要：从19世纪末20世纪初开始，迷宫已经成为心理学家测试动物能力时常用的仪器（啮齿类，猫，狗，以及灵长类）。迷宫任务对实验室测试特别适用，因为仪器本身可以告知动物需要它们做的是什么（类似于人类实验的指示语）。 1　发展历史及迷宫类型 2　研究现状 3　我国学者利用迷宫进行的研究 国内己有一些研究中应用迷宫方法，特别是采用T迷宫或Y形迷宫作为考察辨别学习的工具，检验动物学习记忆特点及其脑机制以及药物对动物学习行为的影响。进入90年代以来，Morris水迷宫的应用较多。研究者用水迷宫来测量空间认知，考察脑损伤（如颞叶、海马、基底神经节损伤或切除等）对大鼠空间学习和记忆能力的影响。隋南等人还依照Morris迷宫实验的特点设计了简便易行的Morris迷宫图象自动采集系统，此系统包括数据采集、实时数据处理、实验数据分析并生成所需各种数据文件和数据图等一系列功能，而成本仅为国外同类产品的1/5。这些行之有效的工具和方法为动物学习、记忆等认知过程及其脑机制的研究提供了重要的证据。

一.　通常观察啮齿类动物在0F中的如下行为： 1-探究行为(explore) 包括用鼻子嗅闻空气和旷场地板气味等运动行为。该运动通常 表现为弯曲的运动路线，运动速度很慢．而且动物身体腹部常紧贴着旷场地板。 2-走动行为(walk) 常表现为较直的运动路线和相对较快的活动速度，且不用鼻子嗅 闻空气和旷场地板气味等运动行为。 3．旋转行为(spinturn) 包括追逐自己尾巴而形成的固定模式的环绕运动。 4·自我梳理行为(selfgroom) 快速清洁面部、前足和身体的行为。典型的完全的梳理 过程通常开始于动物轻轻地搔抓面部。动作逐渐增多并沿着身体向下．终止于尾尖。不论完 全梳理和非完全梳理过程(常在梳理身体时中断)均应被计人“梳理”过程。 5·坐(sit) 睁着眼睛而嗅闻空气的非运动状态。定义“坐”的最小非运动时间应为3s。 6．睡眠(sleep) 眼睛紧闭且完全不运动状态。 7·伸展注意行为(stretchattend) 动物伸展身体，特别是从比较安全之处(如旷场角落) 向着相对较不安全之处(旷场中央部分)伸展身体．是动物对危险的评价行为。动物腹部保持 平坦紧贴旷场底部，并用鼻子嗅闻空气和地板气味。当头部和前足向前伸展时，后足保持不 动一该行为往往结束于前足“后退一步”，从而使身体不再伸展。当进行一系列伸展注意行为 时或者伸展注意行为之后进行运动活动则“后退一步”行为就不完整：在此情况下，应对任何 一次身体完全伸展记数为。伸展注意”行为． 8·返回行为(return) 当进行非常慢的探索行为时，动物经常返回到起点。在整个过程 中动物腹部紧贴旷场底部保持平坦． 9·后腿站立(rear)动物站立．双前足离开地板：沿旷场侧壁站立时．动物常靠在旷场 侧壁上。 10．gt6(jump)所有四足全部离开旷场地板。

经过大量的实验研究和临床观察已经证明：不同的学习记忆类型有不同的神经结构基础和不同的神经环路参与，脑内有多重记忆系统存。最明显的有两大类记忆系统：一是认知性的学习与记忆，又称陈述性的学习与记忆，这类记忆进人意识系统，比较具体，可以清楚地描述；二是反射性成程序性学习记忆，又称内隐性学习记忆，也就是技巧性或运动性学习记忆，它与习惯的养成和适应性反应有关，学会以后不再需要意识的参与，而是一连串的自动化动作。

心理应激动物模型的制作与行为学测试 一、心理应激动物模型的制作 人们在复制心理应激动物模型方面做了大量工作,但情绪毕竟是复杂的,躯体应激与心理应激因素的区别始终是应激研究中的难关,难于绝对地在实验中进行模拟或类比。下面是几种常见的动物模型制作方法,为进行心理应激研究提供参考。 1 . 社交失败应激动物模型: 雄性大鼠放入单独饲养大鼠笼中, 单独饲养大鼠会攻击实验组大鼠, 撕咬侵入者的头部、颈部和背部(无外伤发生)。社交失败的定义是:实验大鼠至少受到一次攻击, 并且表现出驯服的姿势, 如防御性直立、仰 卧、静止不动等 。由于最后得到的实验对象未受到明显的躯体刺激, 因而可以认为是较理想的心理应激模型。 2 .Communication Box 大鼠模型: 被电击的大鼠惊叫、惊跳; 实验组大鼠不受电击, 但旁观其他大鼠遭受电击的过程,通过视觉、听觉等而产生心理应激。每次持续30分钟,隔天1次, 连续两周 。 3 . 行为限制( 束缚制动) : 将造模大鼠置于自制束缚制动盒内, 限制大鼠的活动空间, 每日1 次, 每次2小时,造模大鼠在制动期间禁食、禁水。6天后进行检测。 4 . 多重复合慢性应激: 将隔离应激、新环境应激、拥挤、社交失败应激等4 种刺激随机安排到28 日内,每日1种,产生慢性轻度不可预见性的应激。由于慢性应激是模拟抑郁症的环境诱因,动物的行为特征改变、血浆皮质激素升高等均与内源性抑郁症状相似,作为抑郁模型具有较高的价值。

1动物实验 1.1跳台实验 1.1.1原理 反应箱底铺有通36v电的铜栅，动物受到电击，其正常反应是跳上箱内绝缘的平台以避免伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台，如此训练5min，并记录每鼠受到电击的次数或叫错误次数，以此作为学习成绩。24h或48h重作测验，此即记忆保持测验。记录受电击的动物数、第一次跳下平台的潜伏期和3min内的错误总数。停止训练5天后（也可以在训练后的一周、两周或其它时间点）进行记忆消退实验。 1.1.2仪器与试剂 跳台仪：该装置为10×10×60cm3的被动回避条件反射箱，用黑色塑料板分隔成5间。底面铺以铜栅，间距为0.5cm，可以通电，电压强度由一变压器控制。每间左后角置一高和直径均为4.5cm的绝缘平台。 试剂：樟柳碱、环已酰亚胺、乙醇。 1.1.3实验方法 1.1.3.1实验动物 断乳鼠，体重10g左右；或成年鼠，体重18-22g用于改善老年人记忆的产品必须采用成年鼠。雌雄均可，单一性别不少于10只（最后有效数据）。推荐使用近交系小鼠。 1.1.3.2剂量设计和分组 共设高、中、低、对照四个组，根据推荐的人体每日每公斤体重摄入量，扩大10倍作为其中一个剂量组，根据受试样品的具体情况另设两个剂量组。经口给样。原则上连续给样30天，也可根据实验需要自行设定给样期限。

多参数监护仪的基本原理 监护仪功能各异， 其具体工作原理也不同，但一般都是通过传感器感应各种生理变化，然后放大器会把信息强化，再转换成电信息，这时数据分析软件就会对数据进行计算，分析和编辑，最后在显示屏中的各个功能模块显示出来，或根据需要记录，打印下来，当监测的数据超出设定的指标时，就会激发警报系统，发出信号引起医护人员的注意。 硬件构成 测量服务器（包括生理感受器（即传感器），信号放大器，数据模拟处理，数据分析处理，数据输出接口等。） 数据分析及记录和警报系统

显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等，例如多莉羊就是运用细胞核移植技术而成功的；而转基因技术指的是将外源基因导入体细胞并能稳定的嵌入宿主动物的生殖细胞染色体中的一门技术，基因转殖动物被定义为由人为的方式将外源基因引入体内而引起基因改变的动物，并可将遗传特质传递到接续的每一世代中。 微注射应用的范围非常广泛，从辅助（体外）细胞受精技术至分子和细胞基本组分的转运都需使用这一技术，比较典型的是将某些物质注射进细胞中以操作和/或监测某种特定的存活细胞中的基本机体生物化学状态。这些可以注射进细胞的物质包括有：各种细胞器、激酶、组织化学标志物（比如辣根过氧化物酶或者荧光黄）、蛋白质、代谢物质、微磁头、离子、抗体、基因、分子生物学的mRNA和DNA等等。运用这一技术，也可以实现用于单个细胞或一组细胞的较少量（皮升至毫升）药剂或药物的精确输送（微灌注），例如药理学的药物检验。转基因动物的制作，可以利用基因微注射（gene microinjection）、胚干细胞（embryonic stem cells,ES cells）、精子载体（sperm vector）、反转录病毒感染（retroviral vectorinfection）及体细胞核移置（somatic cell nucleartransfer）等方法达成，其中显微注射为目前应用最普遍之方法之一。

设备和试剂 --6厘米细菌培养皿 --M2培养基+1毫克/毫升牛血清白蛋白（sigma） --M16培养基+ 1毫克/毫升牛血清白蛋白（sigma） --BLS胚胎聚集针（DN-10 或DN-09） --ES细胞单细胞悬液 --窄口移液管（处理细胞和胚胎）来自Pasteur移液管或其他合适的玻璃毛细管（移液管内径的应? 100μm ） --来自雌性促排卵的八细胞胚胎 -- Tyrode’s液，酸性（ sigma） --CO2孵化器

如何运用BLS细胞融合仪及胚胎聚集针创建胚胎 注射器内吸入培养基，在35mm组织培养板上微滴（大致直径3mm）点样成若干行（列）。向培养板内小心注入石蜡油使其覆盖整板，注意不要使石蜡油直接倾倒在微滴上。石蜡油很容易越过这些微滴。石蜡油的量要完全覆盖这些微滴。使用配件按照说明操作，制作凹陷。 37度，5%CO2条件下孵育培养板几小时，目的是让培养基在液滴内达到平衡。这一步可以在形成凹陷的步骤之前进行。 实验前准备好待聚集的细胞，组织或胚胎，不要将它们长时间暴露在室温下或脱离最适培养条件时间过长。通过在组织培养板盖上加入几滴M2培养基和Tyrode’s酸溶液来去除卵透明带。将组织培养板的培养区域表面如此处理后，胚胎将本能的黏附在表面—因此我们需要使用盖。确认所有培养基溶液和酸液都接近室温。将胚胎放置在一滴M2培养基上。取尽可能少的内含10-20个胚胎的培养基，并移到一滴酸液上。重复这个步骤并将胚胎移到新的一滴酸液上。让胚胎在吸头内保持上下移动，观察卵透明带是如何溶解的。迅速将胚胎移入M2培养基。用几滴培养基溶液洗涤并移入刚才制成的凹陷中。 胚胎培养条件是聚集产量的一个重要因素，因为胚胎要培养过夜，如果是四倍体胚胎在移入母体前需要培养48小时。在培养的每个细节都必须小心操作控制。这包括温度，大气，培养基，室温操作时间及矿物油质量。

在体外培养条件下，动物细胞会自发融合，但是频率极低。因此，一般都需要添加具有诱导细胞融合效应的生物或化学药剂，或者采用电融合技术，人为地促进细胞融合。 病毒诱导融合 病毒是最早采用的融合剂。常用于诱导动物细胞融合的病毒有仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒等，其中仙台病毒最常用。用作融合剂的病毒必须事先用紫外线或β-丙内酯灭活，使病毒的感染活性丧失而保留病毒的融合活性。 用灭活的仙台病毒诱导细胞融合的 优点：融合率较高，对各种动物细胞都适宜，且仙台病毒能在鸡胚中大量繁殖，容易培养； 缺点：仙台病毒不稳定，在保存过程中融合活性会降低，并且制备过程比较烦琐。此外，病毒引进细胞后，可能会对细胞的生命活动产生干扰。

胚胎显微操作-胚胎分割 (一)概况 胚胎分割是通过对胚胎进行显微操作，人工制造同卵双生或同卵多生的技术，它是扩大胚胎来源的一条重要途径，其理论依据是早期胚胎的每一个卵裂球都具有独立发育成个体的全能性。 本世纪三十年代，Pinrus等首次证明兔2细胞胚的单个卵裂球在体内可发育成体积较小的胚泡。之后，Tarkowski等人的实验胚胎学研究成果进一步证明了哺乳动物2细胞胚的每一个卵裂球都具有发育成正常胎儿的全能性。七十年代以来，随着胚胎培养和移植技术的发展和完善，哺乳动物胚胎分割取得了突破性进展。Mullen等于1970年二分2细胞期鼠胚，通过体外培养及移植等程序，获得了小鼠同卵双生后代。Willadsen于1979年通过分离早期胚胎的卵裂球，成功地获得了绵羊的同卵双生后代。国内张涌等通过分割小鼠、山羊早期胚胎，均获得了同卵双生后代。进一步研究表明，四分胚，八分胚也可以发育成新个体。窦忠英等将7日龄的牛胚胎一分为四，实现了同卵三生。值得说明的是，随着胚胎分割次数的增多，分割胚的发育能力明显降低，这可能与胞质的不断减少有关。 (二)分割方法 胚胎分割方法主要有显微操作仪分割和徒手分割两种。

绿色荧光蛋白GFP的应用 绿色荧光蛋白GFP的应用主要集中在利用其荧光性质的基础上作为一种标记物。 1 绿色荧光蛋白GFP在分子生物学上的应用 1.1 绿色荧光蛋白GFP作为报告基因 报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的DNA，如传统的荧光素酶（LUX）基因和β-葡萄糖苷酶（GUS）基因。绿色荧光蛋白GFP作为基因报告可用来检测转基因效率，把绿色荧光蛋白GFP基因连接到目的基因的启动子之后，通过测定GFP的荧光强度就可以对该基因的表达水平进行检测。目前，此方法无论在农杆菌介导或基因枪介导的植物遗传转化中还是在活细胞、转基因胚胎和动物中都已得到非常广泛的应用，特别是在活细胞基因表达的时空成像方面。 1.2 绿色荧光蛋白GFP作为融合标签 绿色荧光蛋白GFP最成功的一类应用就是把绿色荧光蛋白GFP作为标签融合到主体蛋白中来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用，或者靶向标记某些细胞器。在多数情况下，绿色荧光蛋白GFP基因在N-或C-末端与异源基因用常规的分子生物学手段就可以接合构成编码融合蛋白的嵌合基因，其表达产物既保持了外源蛋白的生物活性，又表现出与天然GFP相似的荧光特性。GFP的这种特性为蛋白质提供了一种荧光标记，不仅可以检测蛋白质分子的定位、迁移，还可以研究蛋白质分子的相互作用以及蛋白质构象变化，并依靠荧光共振能量转移即FRET来进行检测。