Princeton 蛋白质纯化试剂盒-Pro Spin

蛋白质纯化试剂盒----Pro·Spin

Pro·SpinTM 离心柱的设计以去除标记抗体中游离的荧光染料、半抗原和载色体等为目的，有利于缓冲交换和脱盐。（请参照“综合启示”一节中有关其它类型蛋白纯化的补充说明）
纯化单元由（1）一个特殊的含有凝胶过滤介质的多空微量离心管，（2）清洗管，（3）样品收集管组成。
使用缓冲液水化离心柱介质（参照第二步有关水化缓冲液注解）。在微量离心机中离心去除多余的液体。将抗体样品上样在离心柱上，再次离心，回收纯化的标记抗体。
Pro· SpinTM 离心柱具有下列优良特性：
?? 多样 去除染料、半抗原或盐
?? 高效 标记抗体的回收率大于90%
?? 简单 仅需要一个台式离心机
?? 快速 仅两次2分钟的离心步骤
?? 可靠 一致的结果
?? 方便 室温储存稳定?长久的保质期
1 mg 标记抗体纯化方法
1. 每一个离心柱可容纳样品近100uL，如果样品体积大于100 uL，则将样品分成份，每份使用不同的离心柱进行纯化。
2. 轻轻敲击离心柱以确保干胶沉到离心管底部，打开离心管顶盖，加入650 uL水化缓冲液。
水化缓冲液注意事项：
用PBS缓冲液水化离心柱。除了PBS之外，其它缓冲液也可使用，但有可能使非特异性抗体通过离子的或疏水性相互作用与离心柱结合。这些相互作用会影响标记抗体从离心柱中的回收。
3. 盖上顶盖，剧烈震荡5秒钟，短促敲击离心管底部去除气泡。离心柱使用之前，至少水化30分钟。

离心柱水化注意事项：
使所有干胶都水化是非常重要的。.
4. 水化30分钟之后，打开离心柱顶盖，拿掉离心柱底部的塞子。
离心柱储存注意事项：
水化的离心柱可以在4°C储存几天。补充10 mM叠氮化纳可以储存更长时间。使用之前将离心柱恢复到室温。
5. 使用可变速离心机，在750 x g下，将离心柱同清洗管一起离心2分钟，以便去除多余的液体。
固定角微量离心注意事项：
如果使用固定角微量离心，将定位标记模子放入到离心柱中，以便保持追踪离心柱的位置。
准确离心速度的计算
使用水平式转子或吊桶式转子可以得到最高的产量。然而，固定角转子微量离心也可以得到满意的结果，并且省时。 对于可变速微量离心，不要使用按压式按钮，因为转速会超过设定而使转子以最大的离心力运行。如果不能确定在设置的离心速度上所产生的重力，则使用下面的公式计算出正确的速度：

在这里：
rpm = 每分钟转
RCF= 相对离心力
r = 半径，是从转杆中心到转子桶底部的距离
6. 用纸吸掉离心柱末端小滴液体，弃去清洗管和多余液体。不要使凝胶过分干燥。即刻进行样品处理。结合抗体的纯化
7. 将离心柱拿到明亮处，取出约100 uL样品（参见步骤1），加到每个离心柱的顶端。
离心柱上样注意事项

吸管的头触及离心柱的侧壁，因为这会降低纯化的效率。
8. 将各个离心柱放到收集管中，再将二者放到转子中，保持固定的离心柱方向。
离心柱定位注意事项
离心柱中凝胶介质的最高点应该总是朝向转子的外侧。
9. 750 x g，离心2分钟，纯化的抗体结合物将被收集到收集管的底部。
10. 弃去离心柱
11. 在合适的条件下储存纯化的抗体
标记抗体的回收
通过表面荧光图象和考马斯亮兰染色的SDS变性凝胶电泳的检测得知，使用PBS水化缓冲液水化离心柱，可以回收90%多的荧光素标记抗体。
材料供给
50个Pro•Spin 离心柱；50 只清洗管；50 只样品收集管
推荐附加材料
微量离心机；移液器（枪）；枪头；微量离心管架；震荡器
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标记蛋白纯化综合启示
除了抗体之外，使用Pro•Spin离心柱也可以从蛋白中去除染料、半抗原、载色体和盐。然而，由于蛋白与离心柱基质特异性或非特异性的相互作用，使蛋白的回收率降低。下表中列出了常见的相互作用模式，并给出了解决的方法。

         Pro·Spin 和 Fluoro·Spin 是Princeton Separations 有限公司的产品商标。NIRD (Near Infrared Dye近红外线染料) 是EMP Biotech GmbH公司的产品商标。 NIRDS 由Dyomics 生产。

技术参数：

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