Princeton DNA测序Centri Sep Columns

仪器简介：

一、Centri •Sep Columns
使用CENTRI-SEP离心柱可以快速、有效地将大分子（蛋白质、核酸、碳水化合物复合物等）从小分子（核苷酸、缓冲液盐分等）中纯化出来。柱子基于 Sambrook 等(1)描述而设计，即用凝胶过滤法将缺刻平移反应中的DNA纯化。纯化装置是由一个特殊的多孔微型离心管、干胶、清洗管和样品收集管组成，所有的设计都是以纯化为目的。
该凝胶可以极好地回收大于16碱基对或25-mer的DNA片断，并去除高于98%的盐分、核苷酸混合物和其它低分子量化合物。
使用试剂级水或合适的缓冲液水化离心柱，在微量离心管或吊桶式离心管中离心，去除液体。然后，将样品加到凝胶柱上，再次离心，进行样品处理。通过去除低分子量的化合物而使样品纯化，再使用选择的缓冲液将纯化的蛋白交换出来。
1、当用ABI 373A 和 377A进行DNA测序时的荧光素反应混合物的纯化。
2、去除下列反应DNA/RNA中游离的标记dNTP’s：
􀁺 缺刻平移
􀁺 末端标记反应
􀁺 聚合反应
2、在多种限制性消化反应中，脱盐、去除痕量酚或交换缓冲液中的盐分。
3、蛋白的纯化与脱盐。
对于一些通用技术如酚/氯仿抽提和乙醇沉淀等，这些离心柱的使用具有方便、快速、无毒等优良特性。

迅速有效的分离
􀁺 不需预选择缓冲液
􀁺 室温条件下，离心柱稳定
􀁺 方便20-100μl样品的纯化
离心注意事项：
􀁺 使用水平式转子或吊桶式转子可以得到最高的产量。然而，固定角转子微量离心也可以得到满意的结果，并且省时。
􀁺 对于可变速微量离心，不要使用按压式按钮，因为转速会超过设定而使转子以最大的离心力运行。如果不能确定在设置的离心速度上所产生的重力，则使用下面的公式计算出正确的速度。

在这里：
rpm = 每分钟转
RCF= 相对离心力
r = 半径，是从转杆中心到转子桶底部的距离

质量控制：对每一批CENTRI-SEP离心柱的分离效率都经过检测，保证精确性。

材料供给：
􀁺 CENTRI-SEP离心柱包括干胶
􀁺 清洗管（2ml）
􀁺 样品收集管（1.5ml）
推荐附加材料：
􀁺 微量离心机（Eppendorf 5415C，可变速或等速）
􀁺 可调移液器（Pipetman 100 μl）
􀁺 移液Tips(枪头)
􀁺 球状移液管（Dispo, 2ml乳胶）
􀁺 微量离心管架
􀁺 振荡器
常见问题：
1. 离心柱水化之后没有将间隙液体除净。
2. 在纯化样品过程中触摸了离心柱。这两种操作错误都会导致无效的分离。

解决方法：
1. 如果注意到某一离心柱在第一次离心后所释放出来的液体比其他的少，则再短暂离心一次，通常可除净多余的液体。
2. 将样品直接点在凝胶床的中心，不要让样品接触离心柱的壁。
（1）Reference: Sambrook, J., Fritsch. E.F., and Maniatis, T., Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory. 1989.

技术参数：

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