用于在大肠杆菌中表达的载体

Strep-tag^Ò 载体概览：

　　IBA提供多种用于在大肠杆菌中表达的pASK-IBA载体以便携带有Strep-tag的重组蛋白表达。除了抗生素抗性基因（Amp^R, Cam^R），pASK-IBA载体仅在XbaI和HindIII限制性酶切位点之间有区别。其区别如下图所示：您可以在N-或C-端标签之间、细胞质外周表达或细胞质表达之间和/或用以去除标签的内蛋白酶切割位点（Factor Xa, enterokinase, thrombin 和 TEV protease）之间作选择。请注意，通常无须去除标签。

 

双标签和6xHistidine-tag载体概览：

　　除了Strep-tag^Ò 载体，IBA还提供带有Strep-tag和6xHistidine-tag的双标签载体以及6xHistidine-tag载体。一个蛋白质上的两个不同标签能产生最高的纯化因素，使得可以在变性或生理条件下纯化全长蛋白质。而且，直接从培养基开始的纯化操作可以被优化。

　　载体仅在XbaI和HindIII限制性酶切位点之间有区别。

 

哺乳动物表达载体

　　IBA的pEXPR-IBA载体是专为哺乳动物细胞中高水平表达和纯化重组Strep-tag^Ò和/或 6xHistidine-tag融合蛋白而设计的。这些载体的克隆策略相同，因而与相应的细菌pASK-IBA质粒相兼容。因此，一个PCR片段可以被平行克隆进pASK-IBA及其相等的pEXPR-IBA。人巨细胞病毒(CMV)立早启动子在很多哺乳动物细胞中提供强表达。为了延长在转染细胞中表达的时间，载体会在潜伏感染了SV40大T-抗原（如COS7）的细胞系中复制。此外，新霉素抗性基因可以允许直接筛选稳定的细胞系。

 

pEXPR-IBA 特点	益处
Strep-tag II	采用Strep-Tactin基质纯化重组蛋白
CMV 立早启动子/增强子	在多种哺乳动物细胞中高水平表达
多克隆位点	插入目标基因并与Strep-tag和/或6xHistidine-tag融合。与pASK-IBA载体兼容
新霉素抗性基因	在哺乳动物细胞中筛选稳定的转染子
氨卞青霉素抗性基因	在E. coli中筛选
pUC复制起始位点	在E. coli中高拷贝复制
BM40 (仅见于pEXPR-IBA42 和44 )	使蛋白质分泌进培养基中
Factor Xa, thrombin (thb), enterokinase (ent) ,TEV protease (TEV)切割位点	如果需要可以除去Strep-tag（一般不需要）