2020/08/13 14:29
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方案摘要:
产品配置单:
普瑞邦 全自动均质器 Muti-Prep2000s
型号: Muti-Prep2000s
产地: 新加坡
品牌: 普瑞邦
¥22万
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Pribolab ASSP-100 全自动标液配制仪
型号: ASSP-100
产地: 新加坡
品牌: 普瑞邦
¥10万 - 30万
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均质器 黄曲霉毒素检测高速均质器
型号: 800S
产地: 新加坡
品牌: 普瑞邦
¥4800
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PriboLab(普瑞邦)黄曲霉毒素固体、液体标准品
型号: 1、5、10、50、100mg
产地:
品牌: 普瑞邦
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2µg/mL 黄曲霉毒素 B1&G1 0.5µg/mL 黄曲霉毒素 B2&G2 乙腈
型号: 1.0ML/2.0ML
产地:
品牌: 普瑞邦
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方案详情:
动物组织(肝脏、肌肉)中黄曲霉毒素B族和G族的检测解决方案
关键字:
动物组织;黄曲霉毒素;免疫亲和柱;高效液相色谱法
介绍:
采用80%甲醇全自动高速均质提取样品中的黄曲霉毒素,冷冻离心去脂,样品经稀释后通过免疫亲和柱去除杂质净化富集,甲醇洗脱。洗脱液氮气吹干后以初始流动相复溶,经高效液相色谱分析。
前言
黄曲霉毒素是最早发现的真菌毒素,其中以黄曲霉毒素B1毒性最强,已被列为I类致癌物。动物食用被真菌毒素污染的饲料后,毒素会随食物链转移到动物体内,造成对生长发育及畜产品品质的影响。研究动物体内毒素含量对于饲料污染控制及畜产品风险评估具有重要意义。目前对于动物组织中黄曲霉毒素的检测尚无标准方法。本文在文献方法的基础上进行优化验证,建立动物组织(肝脏、肌肉)中黄曲霉毒素B族和G族的检测解决方案,供分析实验者参考。
实验过程
1 仪器、耗材
Pribolab®MP 2000全自动多样品均质器
Pribolab®ASSP-100全自动标液配制仪
Pribolab®12位泵流操作架
Pribolab®黄曲霉毒素总量免疫亲和柱
岛津LC-20A液相色谱-RF-20A荧光检测器
Pribolab®KRC光化学柱后衍生器
Pribolab®黄曲霉毒素混合标准品
2 液相条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-乙腈-水(30:10:60)为流动相,流速:1.0 mL/min,进样量20 μL;采用柱后光化学衍生法,以荧光检测器检测,激发波长:360 nm,发射波长:450 nm。
3 标准曲线配制
采用Pribolab®ASSP-100全自动标液配制仪,进行标准曲线配制,参考《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》输入目标浓度及目标体积,等待仪器运行完成后取出配制好的混合标准品,上机分析。
标准品配制程序设置如下:
经ASSP-100全自动标液配制仪配制的曲线相关系数如下表:
表1 黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1回归方程及相关系数
Table 1 Regression equation and correlation coefficient of aflatoxin G2, G1, B2 and B1
项目 | 回归方程 | 相关系数R2 |
黄曲霉毒素G2 | y=5E+06x-286057 | 0.9994 |
黄曲霉毒素G1 | y=2E+06x-619767 | 0.9993 |
黄曲霉毒素B2 | y=1E+07x-246940 | 0.9997 |
黄曲霉毒素B1 | y=5E+06x-674266 | 0.9997 |
4 样品前处理
精密称取粉碎后的样品(肌肉组织去除筋膜)5 g,加入1 g氯化钠,准确加入25 mL80%甲醇水溶液。设置均质时间120S,均质速度8档,动物组织属于附着度较高的样品,清洗方式需选择1,清洗时间60S,萃取选择0。
萃取液4℃离心6000r/min,5 min。取上清液过5 mL净化液,加入专用稀释液20mL,混合均匀后全部通过免疫亲和柱,用10 mL专用淋洗液和10 mL水淋洗,弃去洗脱液,再用1.5 mL甲醇洗脱,收集洗脱液,用水定容至2 mL,混匀即可。
5 加标回收验证
选择鸡肝脏、肾脏、肌肉样品各5 g,精密吸取混合标准品溶液(黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的浓度分别为300、1000、300、1000 ng/mL)25 μL,加标水平为黄曲霉毒素B1、G1 5μg/kg,黄曲霉毒素B2、G2 1.5μg/kg。
6 结果分析
选择鸡鸡肝脏、肾脏、肌肉样品加标,回收率在65.9%-83.6%,其中黄曲霉毒素G1回收率偏低,黄曲霉毒素B1回收大于79.4%。
表2 三种样品加标回收率
Table 2 Recovery rate of three kinds of Samples
项目 | 肝脏/% | 肾脏/% | 肌肉/% |
黄曲霉毒素G2 | 71.4 | 77.1 | 74.2 |
黄曲霉毒素G1 | 70.8 | 69.2 | 65.9 |
黄曲霉毒素B2 | 77.2 | 75.5 | 73.4 |
黄曲霉毒素B1 | 83.6 | 78.1 | 79.4 |
7 配置方案
产品名称 | 规格 | 型号 |
液相色谱柱MycoChrm C18 | 5μm 4.6*150mm | 185150 |
黄曲霉毒素总量免疫亲和柱 | 25T(3mL) | IAC-011-3 |
黄曲霉素B1B2G1G2混标 | 1.0µg/mLB1,G1; 0.3µg/mLB2,G2 | STD#1082 |
饲料中黄曲霉毒素* | >10 ppb(高中低) | MRM-A-SF |
泵流操作架 | 亲和柱批量操作 | EQ-RACK 8/12 |
Muti-Prep 2000S 全自动多样品均质器 | —— | MP 2000 |
ASSP-100 全自动标液配制仪 | —— | ASSP-100 |
光化学衍生器KRC | KRC-II |
*此类为自然污染物质,每批次供应量有限,不同批次产品浓度不同。
本文中的信息、说明和技术指标如有变更,恕不另行通知!
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