普瑞邦饲料中真菌毒素检测的解决方案

    一、公司简介

    Pribolab（普瑞邦）是面向全球提供霉菌毒素检测解决方案的服务商之一，凭借强大的研发团队和专业的霉菌毒素检测技术的研究，为全球农业生产、食品加工与粮食、饲料工业等行业提供专业的霉菌毒素检测技术与产品服务，同时为社会提供食品、饲料及饮料等的霉菌毒素、食品成分等检测分析。

    二、伏马毒素起因和特性

    伏马毒素主要是由串珠镰刀菌菌f.moniliforme和f.proliferatum在一定温度和湿度条件下繁殖所产生的次级代谢产物。到目前为止，发现的伏马菌素有FA1、FA2、FB1、FB2、FB3、FB4、FC1、FC2、FC3、FC4和FP1共11种。粮食在加工、贮存、运输过程中易受上述两种真菌污染，特别是当温度适宜时，更利于其生长繁殖，从而产生出一类结构性质相似的毒素，其中FB1是其主要组分占60％以上，其毒性也最强。因此，伏马毒素可以通过粮食加工、饲料生产等过程对畜牧业乃至人类健康产生较严重的危害。

    FB1对食品污染的情况在世界范围内普遍存在，主要污染玉米及玉米制品，其污染的饲料主要为以玉米为原料的饲料。1996年我国对玉米、小麦等粮食作物中FB1污染进行调查。发现不同地区均有不同程度污染。我国食道癌高发区林县的玉米伏马菌素污染率为48%。因此，人们怀疑该地区食道癌高发与食用污染此毒素玉米相关。该毒素已被世界卫生组织列为近年来首先进行研究的几种霉菌毒素之一。

    三、 伏马毒素的危害

    1．马大脑白质软化症              
　　这是一种马的神经失调疾病。根据1988年南非研究人员的试验结果，每天以0.125mg／kg体重的水平给马进行皮下注射，大约7天后马开始发疯、发狂，冲撞栏杆而死。解剖发现马的大脑呈现白质软化症状。1989年，玉米中的伏马毒素给美国有很多州的农业和畜牧业造成了巨大的损失。               
　　2．猪肺水肿             
　　1992年和1994年美国和南非的科学家研究表明，每天伏马毒素的摄取量在0.4mg／kg体重以上均可引发猪的肺水肿，还可造成猪生殖系统的紊乱，如早产、流产、死胎和发情周期异常等。这种病在美国及其他国家都有发现。
　　3．小鼠肝癌              
　　1991年南非科研人员对小鼠进行了伏马毒素的毒理试验，试验结果表明伏马毒素引发肝癌。1998年又对大鼠进行了伏马毒素毒理试验，获得相同的结果。                
　　4．人类食道癌              
　　早在1988年南非科学家就对食道癌发病率高和低的地区进行过调查，食道癌发病率与主食玉米受伏马毒素污染呈正相关，进一步的动物试验也得到了相同的结果。1994年中国学者和日本学者对食道癌高发区的河南省林县进行了一次调查，发现该地区主食玉米中伏马毒素水平高达30~50mg／kg，发霉玉米中伏马毒素最高值达118.4mg／kg。目前伏马毒素引发食道癌的机理还不清楚，需进一步确证和研究。 

    四、各国对伏马毒素的限量标准

　　2001年美国食品与药物管理局(FDA)发布了供人类食用的玉米和玉米产品伏马毒素最高限量指导性公告，规定人类食用玉米中伏马毒素最高限量为2mg／kg；同时，FDA的畜牧医学中心(CVM)也发布了动物饲料中伏马毒素的最高限量指导性公告，规定其限量范围为1~50mg／kg。

            　　表2  FDA对伏马毒素在动物饲料中的推荐限量标准（2000年6月）

 *以干基作为计算基准

    五、伏马毒素的检测

    免疫亲和柱+荧光仪检测法和HPLC法。

符合国标GBT 25228-2010 粮油检验 玉米及其制品中伏马毒素含量测定 免疫亲和柱净化高效液相色谱法和荧光光度法。

    六、普瑞邦伏马毒素检测方案介绍

   （一）免疫亲和柱-高效液相色谱法：

    Pribolab（普瑞邦）应用免疫亲和柱净化，利用高效液相色谱仪和荧光检测器检测可提供伏马毒素测定的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，是一种很好的检测伏马毒素的方法。

    1.设备和耗材配置　　

    2. 样品前处理:普瑞邦针对食品饲料提供不同的处理方案

    花生，玉米，大米，小麦及其制品和饲料

    ----将50 g 研磨的样品 + 5g盐置于均质杯中。

    ----加入100mL 甲醇：水（80：20）溶液。

    ----盖上杯盖，高速均质5分钟。

    ----4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤；

    ----取10mL滤液并加入40mL PBS溶液将滤液稀释，混匀，用玻璃微纤维滤纸过滤，取稀释后液体待测；

    ----将上步稀释液通过微纤维滤纸过滤，滤液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL。

    3. 免疫亲和柱净化: 富集--洗涤--洗脱--收集全部洗脱液供化学衍生检测用。

    4. 衍生化反应

    使用邻苯二甲醛OPA和2－硫基乙醇MCE混合液对上述净化样品进行衍生化反应后迅速进样.

    5. 高效液相色谱分析

    HPLC-色谱柱 ：C-18色谱柱   150 x 4.6 mm;      

    流  动  相  ：甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液  77:23    

    流      速  ： 1 mL/min                         

    柱      温  ： 室温     

    进 样 体 积 ： 20μL     荧光检测器：

    λ- 激发波长：335nm 

    λ- 发射波长：440 nm

    HPLC 配   置：高效液相色谱仪带有荧光检测器     

    七、温馨TIPS：

    1. 谷物、饲料中真菌生长繁殖的有利条件主要是适宜的温度与水分。如能将谷物、饲料等贮存于10℃以下，水分保持在10％以下，就能有效地防霉。

    2. 从事真菌毒素科研及检测的人员，必须注意防护，如穿戴隔离衣帽，在进行真菌分离培养工作时，应戴口罩，并尽量防止孢子飞扬。

    3. 操作台面如有漏溅，应立即用新配的5％次氯酸钠消毒。以5％次氯酸钠（NaOCl）处理时，黄曲霉毒素于数秒钟内即被破坏，故是常用的消毒剂。

    4. 也有应用生物学方法解毒的报道，生物学方法成本低，收效大，可能是一种有前途的除毒措施。

    鉴于霉菌毒素对人体的危害，提醒各位奋斗在抗毒一线的老师们一定要注意保护自身安全哦！

    Pribolab中国：北京泰乐祺科技有限公司

    普瑞邦中国技术服务中心：青岛普瑞邦生物工程有限公司

    中国区客服电话400-688-5349

    复杂样品受理电话：13311089404

    E-mail：info@pribolab.cn

    网址：www.pribolab.cn